第二章 基因的概念与结构(2)断裂基因.pptVIP

思考 1、 Interrupted gene 2、 Overlapping gene 3、 Alternative splicing 4、 Intron 5、 Exon 6、 Southern blotting 1、断裂基因仅存在于真核生物中。 2、内含子的突变不会影响蛋白质序列。 3、内含子的位置通常是保守的，而内含子的长度变化很大。 4、外显子序列保守而内含子序列变化多端是由于外显子和内含子中发生突变的概率不同的结果。 5、基因长度与mRNA长度或蛋白质产物长度之间并不相关。 1、什么是染色体步移，染色体步移技术可应用于哪些方面？ 2、你倾向于早期内含子模型还是晚期内含子模型？请说明理由，并给出相反模型的论据的合理解释。 在真核生物基因的分子图谱完成之前，我们一直设想真核生物基因与原核生物基因有着相同的组织结构，我们认为构成基因一定长度的dna和蛋白质之间呈线性关系，但是比较了dna结构和相应的mrna之后，我们发现在很多情况下两者之间存在差异，mran总是包含着这样一段核苷酸序列，这段序列按照遗传密码原则编码相应的蛋白质产物，，而基因中则含有额外序列，它位于编码区域内，并且打断了最终翻译成蛋白质的序列。 * 由断裂基因组成的DNA序列被分成两个部分： 外显子的序列包含在成熟RNA中，精确地说，基因起始于一个外显子的5`端，终止于另一个外显子的3`端。 内含子是插入序列，在初始转录物加工成成熟RNA时被除去。 断裂基因与非断裂基因相比，其表达需要一个额外的步骤。DNA转录成的RNA代表基因组序列。但这个RNA只是一个前体分子，它不能翻译成蛋白质。它首先要去除内含子，形成只含外显子的信使RNA，这个过程称为RNA剪接（RNA splicing）。剪接过程包括内含子从初始转录物中精确去除，内含子去除后形成的RNA的两个末端连接在一起形成一个完整的共价分子。 * * 外显子与内含子的突变对蛋白质与基因的影响不同哦。外显子（exon）通常按照DNA中的相同排列顺序连接在一起。 基因的长度由初始RNA前体的长度决定，而不是由信使RNA决定。 所有的外显子都来源于相同的RNA分子，它们的剪接只是一种分子内反应。通常不存在不同RNA分子之间的外显子的连接，因此从剪接机制上排除了任何不同等位基因序列之间的剪接。若基因中位于不同外显子的突变不能由另一个突变互补，则把它们视为相同互补组中的成员 基因长度与mRNA长度或蛋白质产物长度之间并不相关。 * 内含子的突变不会影响蛋白质序列。错误。 既然内含子不包含在信使RNA中，那么它们发生突变就不会直接影响蛋白质的结构。但是内含子的突变却可以抑制信使RNA产物的生成，比如抑制外显子的剪接。这种类型的突变只作用于携带该基因的等位基因，因此，它们不能被等位基因中的其他突变所互补并且像外显子一样是同一互补组的组成成分。 影响剪接的突变通常是有害的。这种突变大部分是在外显子和内含子的连接处发生单个碱基的置换，这样就导致产物中外显子的丢失和内含子的不切除，或使在异常位点发生剪接。最通常的结果是产生一个终止密码子，从而导致蛋白质序列的截短。引起人类疾病的约15%的点突变是由剪接的破坏而引起的。 真核生物基因没有必要被打断，一些真核生物基因以与原核生物基因相同的方式同蛋白质产物直接相关。在酵母中，大部分基因是非断裂基因，而在高等真核生物中，大部分基因是断裂基因，内含子通常比外显子长，从而产生比编码区域更长的基因。 错误。 * * 而每一个不出现的区域对应一个内含子。 内含子通常不具备可读框，去除内含子后mRNA序列才会产生一个完整的读框。 所有种类的基因都有可能被打断，如编码蛋白质的核基因、编码rRNA的核仁基因和编码tRNA的基因。在低等真核生物的线粒体和叶绿体基因中，我们也发现了断裂基因。断裂基因并非只存在于真核生物中，也存在于细菌和噬菌体中，尽管在原核生物基因组中发现断裂基因的概率非常低。 * * 错误。 * 保守性分离基因！！！对比，多个物种序列保守，则可能含有基因。 * * 从第一个重组克隆插入片段的一端分离出一个片段作为探针从文库中筛选第二个重组克隆，该克隆插入片段含有与探针重叠顺序和染色体的其他顺序。从第二个重组克隆的插入片段再分离出末端小片段筛选第三个重组克隆，如此重复，得到一个相邻的片段，等于在染色体上移了一步，故称之为染色体步移（Chromosome Walking）染色体步移技术（genome walking）是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。 外显子捕捉技术外显子捕获 外显子捕获(exon trapping) 是构建一种载体，从其插入片段中识别和回收外显子序列，从而克隆目的基因。捕获外显子的载体pETV—SD是一种反转录病毒穿