长期毒性试验.docVIP

大鼠的长期毒性试验 1. 目的：观察连续给予受试动物后由于积蓄而对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量，为 人用安全剂量提供参考。 试验条件： 动物：应写明动物的品系，生产单位及生产合格证号，等级，周龄，性别，体重，一般选用动物品系有Wistar、SD、或其他品系的远交系动物。应根据试验期的长短选用不同周龄的大鼠，试验期在3个月内宜用6～8周龄大鼠，超过三个月者宜用5～6周龄大鼠。试验开始时，体重差异应不超过平均体重的20%。 实验动物应雌雄分笼饲养，每笼不宜超过5只动物，所有动物试验前至少观察一周，并记录食量和体重等基础数字。试验报告中应写明饲料供应单位及生产合格证，若用自己配置的饲料，应提供配方及成分含量的检测报告；应写明饲养动物实验室的合格证(未获得合格证者也应注明)及等级。 受试物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配置方法。受试物可以是临床试验制剂。如受试物制剂的体积较大，以不含赋形剂的制剂，如中药浸膏为宜。固态制剂灌胃给药，可选择适当的溶媒溶解，或研磨成细粉后用1%左右羧甲基纤维素钠(或10%阿拉伯明胶)制成混悬液，但应注意临用前需要摇匀。避免混悬不匀引起计量误差。长期毒性试验给药周期较长，固体制剂在配成溶液或混悬液后，冰箱放置，短期内用完，一面受试药物活性降低。 试验方法： ① 受试物剂量：一般设三个剂量组和一个对照组。给受试物剂量单位一般用mg/kg、或g/kg表示。 高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。 中剂量组：应相当或高于药效学试验的高剂量，应使动物产生轻微的或中等程度的毒性。 低剂量组：略高于整体动物的有效剂量，在此剂量下动物应不出现毒性反应，属基本安全剂量。 对照组：不给收拾药物仅给等容量的溶媒或赋形剂，若所用溶媒或赋形剂可能有毒时，另加一组空白对照。 如果急性毒性试验结果毒性很低，测不出LD50，也未见明显毒性反应，可设高、低两个剂量，高剂量一般为拟用于临床剂量50倍以上(有困难时，可适当减少剂量，最低不能低于临床剂量30倍)并应高于药效学试验的高剂量。 每组动物不宜少于20只，雌雄各半，若试验在三个月以上的，应适当增加动物数。 ② 给药方法：给药途径应与推荐临床途径一致，口服药大鼠一般用灌胃法，临床用药途径为静脉注射时，可用其他适宜的注射途径代替。 口服药物长期给药亦可采用掺饲法，即将受试物混入饲料让动物自行食入或将受试物掺入饮水中给予。采用此种方法给药时应提供受试药物与饲料或饮用水混合的均匀性，受试药物的稳定性及有关质量检查等方面的资料，以确定获得准确可靠的实验结果，同时还有适当的措施，保证动物在规定的时间内摄入规定的剂量，否则剂量难以得到保证。故采用此法，申报时应说明摄入规定药量的措施。 ③ 给药容量：一般为1～2ml/100g体重，应根据体重增长调整给药量，用不等浓度等容量给药。 ④ 给药时间：受试物最好是每周7天连续给予。如试验期为三个月或超过三个月时，也可以采用每周给药六天。每天给药时间相同。 ⑤ 给药周期：长毒试验的给药时间应为临床试验用药的2～3倍，最长半年。 临床用药周期为1～3天者，可免做大鼠长期毒性试验；若临床用药周期在1周以内者长期实验应为2周；2周以内者，应为4周；四周以上者，长期毒性试验的给药期一般为临床试验用药期的两倍以上。 ⑥ 外用要治疗局部疾患的，方中不含毒性药材或有毒成分，可不做长期毒性试验，但需做局部刺激试验、过敏试验，必要时需做吸收试验。如外用要治疗全身疾患时，还应作长期毒性试验。 4. 检测项目 ① 一般观察 饲料和饮水消耗：应每周记录，并与体重变化对照观察。 体重变化情况：应每周称重记录，若给药周期≥90天，可每十天称重记录，它能反映动物的生长情况和一般健康状况，并根据体重变化改变给药量。 毒性状况：应每天注意观察，记录有无毒性症状出现。毒性症状的观察或检测包括以下几个方面：中枢和运动神经系统(行为、异常运动、对刺激的反映、神经反射和肌张力)，神经植物系统(瞳孔和分泌物)，呼吸系统(鼻、呼吸及频率)，心血管系统(心前区触诊)。胃肠系统(大便、腹部形态、大便次数、硬度和颜色)，泌尿生殖系统(阴唇、乳腺、会阴部)，皮肤和皮毛(颜色、完整性)，眼(眼睑、眼球)和其他(注射部位、一般状况)。群养时应将发现中毒反映的动物及时取出单笼饲养，重点观察。由于毒性症状有些尽在给药后一定阶段出现，可逐渐自行消失或减轻，也可随时间进行性发展，因此必须列表逐日或逐周(逐个动物)记录，以便看出症状发生、发展的过程，以及各种症状出现的先后次序。这对于判断药物毒性和指导临床具有重要意义。发现死亡和濒临死亡动物应及时尸检。 ② 血液指标：应检查红细胞或网织红细胞计数、血红蛋白(Hb)、白细胞总数