植物组织培养实验 (新)教学材料.ppt

植物组织培养; 一、培养基的成分及作用 二、培养基的制备 ;概念：本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。 这项技术已在快速繁殖、去除病毒、加速育种进程、次生代谢产物生产和种质资源的保存等方面取得了巨大的经济效益、社会效益及生态效益。;;组织培养的几道主要工序： 培养器皿的清洗；培养基的配置、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种；放入培养室培养；试管苗???种植与初期管理。;;;;二、培养基的成分及作用;;;;;;;;;;;植物组织培养Ⅰ——培养基的制备;表4-1 MS培养基储备液的配制;培养基的配制;;;配置1升培养基分工：;配置1升培养基分工：;培养基的配置及灭菌实验准备用品;;;;;;人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。;1、实验器具和材料的准备2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。3、关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下工作台）;4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太长。;5、取流水冲洗（至少30min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次，放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。;6、打开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊子将培养材料置于培养基上，灼烧镊子放回，灼烧瓶口，盖上瓶塞。7、用酒精擦洗工作台和手。进行下一轮操作。;注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 （3）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。;（5）吸取营养液、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。（6）工作中不能面向操作区讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。（7）手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。;接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中;整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速;接种过程中尽可能达到悬空要求;接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口;瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口;接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生;种子和分生组织：培养时通常将其贴放在培养基表面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足;接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中;;接种及培养实验准备用品;接种及培养实验准备用品