项目二超氧化物歧化酶(SOD)的生产预习方案.pptx

项目二 超氧化物歧化酶（SOD）的生产 预习方案;目录;概述;作用;生产工艺;实验原理;实验原理;离心技术;大蒜SOD的提取分离及纯化方法;热变性法：热变性法是依据SOD的稳定性原理设计的。SOD的热稳定性高，当温度低于60℃时，短时将的热处理不会使酶活力有明显的变化，而一般的杂蛋白却在温度高于55℃时就易变性沉淀，因此，对大蒜粗提液进行短时间的热处理可以达到去除杂蛋白的目的。 有机溶剂分级沉淀法：利用向蛋白质溶液中加入弱极性的有机溶剂，改变溶液的介电常数，使不同种类蛋白质的溶解度产生不同程度降低的原理可进行蛋白质的纯化。在粗酶液中逐量加入丙酮，可使SOD及其它杂蛋白的溶解度发生变化，依次从溶液中沉淀出来。;生物材料的选取的总原则： 材料易得 便于操作 效果显著 实验所需材料：新鲜的大蒜蒜瓣 实验所需仪器：烧杯、试管、容量瓶、研钵、冷冻离心机、电子天平、恒温水浴箱、紫外分光光度计、容量瓶、pH计 实验试剂：0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH为7.8）、氯仿-乙醇混合液、冷丙酮、50mmol/L的邻苯三酚、10mmol/L的HCl ;操作步骤;去除杂蛋白： 上清液中加入0.25体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，静止30min(4°C），6000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液 SOD酶的沉淀分离： 粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min,6000r/min离心15min，得到SOD酶沉淀。 将沉淀溶于pH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液5ml中，然后6000r/min离心15min，弃沉淀，取上清液，用凝胶Sephacry1 S-200进行纯化，然后超滤浓缩。 用紫外分光光度计测定浓缩液的蛋白含量 将浓缩液冷冻干燥后即得成品。;SOD酶的检验;紫外分光光度计;紫外分光光度计使用方法;酶活性的测定;样品活性的测定;SOD生产注意事项;参考文献;谢谢观赏