研究生开题报告介绍.pptVIP

1、建立肺及淋巴结转移模型 构建miR-363慢病毒载体，感染Rca-T细胞株， 将0.2ml含有106感染此病毒的细胞悬液分别注射到25只4周龄的雌性裸鼠尾静脉及左后肢足蹼黏膜下后；并将0.2ml含有106感染非miR-363载体病毒的细胞悬液以同样的方式注射另外25只4周龄裸鼠，来作为对照。 （二）、实验方法 分别在14d、21d、28d、35d和42d使用IVIS-100 CCD camera(Xenogen)观察肺部肿瘤转移灶的数量和大小，并通过Xenogen自带软件分别测量处理组以及对照组裸鼠肿瘤灶及转移淋巴结的体积。 2、荧光分子探针示踪，观察肿瘤转移情况 肺转移及淋巴转移的样本将冻存到液氮或者用10%福尔马林固定；这些组织将进一步用免疫组织化学技术检测各种分子，包括miR-363及PDPN的表达变化。 3、分析评价miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用 研究证实，PDPN 3’-UTR区存在有一个保守位点及两个非保守位点，而miR-363能够直接结合并作用于此靶向调控位点，反向调节PDPN的表达，并且呈剂量相关性，从而抑制了肿瘤细胞的转移及侵袭能力。本实验利用荧光分子探针示踪方法，观察比较裸鼠肺内及腘窝淋巴结肿瘤转移情况，用免疫组织化学技术检测各种分子，包括miR-363及PDPN的表达变化，用体内实验的方法来证明miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用。 （三）、研究机制 BACK miR-363慢病毒载体感染头颈鳞癌细胞后裸鼠体内注射 裸鼠尾静脉注射观察肺转移 裸鼠爪垫祝贺观察腘窝淋巴结转移 证实miR-363-PDPN通路在头颈鳞癌转换中的作用 （一）技术路线 三、技术路线及实验难点 1 尾静脉注射形成淋巴结转移需要荷瘤时间较长，大负荷长时间荷瘤往往导致动物的死亡，使得淋巴结转移模型成功率较低。 2 爪垫注射，局部组织载荷瘤量过大，肿瘤局部浸润生长，可能导致局部组织的破坏及破溃，导致裸鼠的死亡，影响实验进程。 （二）技术难点 BACK 2014.2～2014.5 ——设计miR-363的包埋病毒，建立肺及淋巴结转移模型； 2014.6～2014.7——荧光分子探针示踪，观察并记录原发瘤和肿瘤转移情况； 2014.8——免疫组织化学技术检测各种分子， 包括miR-363及PDPN的表达变化，分析评价miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用； 2014.9 ～ 撰写论文 四. 实验进度 BACK 五、参考文献 [1]Petersen CP, Bordeleau ME, Pelletier J et al. Short RNAs repress translation after initiation in mammalian cells. Mol Cell 2006, 21, 533-542. [2] Krichevsky AM, Gabriely G. miR-21: a small multi-faceted RNA[J]. J Cell Mol Med，2009,13(1): 39-53. [3]Yuan P, Temam S, El-Naggar A, et al. Overexpression of PDPN in oral cancer and its association with poor clinical outcome[J]. Cancer,2006,107:563-569. [4] Kawaguchi H, El-Naggar AK, Papadimitrakopoulou V, et al. PDPN: A Novel Marker for Oral Cancer Risk in Patients with Oral Premalignancy[J]. J Clin Oncol,2008, 26 (3):354-60. [5]Kato Y, Fujita N, Kunita A, et al．Molecular identification of Aggrus/T1alpha as a platelet aggregation-inducing factor expressed in colorectal tumors[J]. J Biol Chem, 2003,278: 51599– 51605. [6] Bhalla R, Siddiqui MT, Mandich D, et al.Diagnostic Utility of D2-40 and Podoplanin in Effusion Cell Blocks. Diagn Cytopat