j第八章目的基因的 表达.pptVIP

;第八章 克隆基因的表达;遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程——中心法则（central dogma）。 ;二、克隆基因的表达：;用原核生物作宿主;识别原核细胞的启动子，催化所有的RNA合成。;;;4. 不含内含子，缺乏转录后的加工系统。;二、原核表达系统的注意事项!;是DNA上的能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。;consensus sequences;5’-TTGACA-3’;原核启动子共有序列的功能;（2）翻译的起始位点;AUG（91%） GUG（8%） UUG（1%）;2. 转录终止子;由于茎环3’段紧接一串A/U的配对，稳定性比较差，有利于转录物脱落而不利于转录延续。 ;;;大肠杆菌偏爱UAA。一般安置上全部的三个终止密码防止核糖体跳跃（skipping）。;① 必须是一种强启动子;来自大肠杆菌的乳糖操纵子。;（3）色氨酸启动子trp;;;;;四、外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位;;2. 周质中表达;phoA、OmpA、OmpT、OmpF、LamB、β-内酰胺酶（lactamase）、 肠毒素（enterotoxin）ST-II、LT-B等;鼠源RNase、人生长激素信号肽。;由于需要穿过两层膜，大肠杆菌只能分泌极少的蛋白质到培养基中，效果都不太理想。;;载体表达出的外源基因蛋白质不与细菌的任何蛋白质融合在一起。;哈佛大学的Gilbert实验室建立的。表