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流式细胞术;利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速(每秒可达1000-10000个)的定量分析和分选(纯度可达99%以上)的技术。;;;标本处理;流式细胞术常规检测时的样品制备 ;直接荧光标记法操作简便,结果准确,易于分析,适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高,但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰,因此更适用于临床标本的检测。;(二)间接免疫荧光标记法?取一定量的细胞悬液(约1X106细胞/ml),先加入特异的第一抗体,待反应完全后洗去未结合抗体,再加入荧光标记的第二抗体,生成抗原—抗体—抗抗体复合物,以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。;本方法费用较低,二抗应用广泛,多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体,特异性较差,非特异性荧光背景较强,易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外,由于间标法步骤较多,增加了细胞的丢失,不适用测定细胞数较少的标本。;最小化非特异性结合的方法 ;常用的荧光染料(488波长激发);培养细胞 ;流式细胞术检测培养细胞表面抗原的样品制备方法探讨;操作步骤;;注意事项;注意事项;血细胞 流式检测;氯化铵溶血剂(Ammonium chloride lysing solution,);用氯化铵溶血剂的溶血方法 ;细胞凋亡 流式检测;;PI单染色法 (1);PI单染色法 (2);调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析 ;ISNT的流式细胞仪分析 ;;Hoechst 33342/PI双染色法 ;Annexin V/PI双染色法 ;细胞因子检测;流式检测细胞染色基本过程(以全血为例);流式细胞术分析血小板;质控标本 ;流式细胞仪的调试和使用 ;在操作和使用中一定要注意如下事项: ;
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