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- 2019-10-26 发布于湖北
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脉冲场电泳原理 在琼脂糖凝胶上外加交变的脉冲电场,其方向、时间和电流大小交替改变。 每当电场方向发生改变时,大分子DNA便滞留在凝胶孔内,直至沿新的方向重新定向后,才能继续向前涌动。 Bio-Rad以及脉冲网 Bio-Rad拥有脉冲场电泳的专利,是中国各级CDC、CIQ定牌采购产品。 脉冲网介绍:1996年美国CDC系统和公共卫生实验室合作,以Bio-Rad公司的脉冲场电泳系统作为平台,创建了PulseNet(脉冲网)。PulseNet的成员全部采用标准的设备、标准的电泳程序和标准的样品制备方法,构建出从病人或食物中分离的病原细菌的PFGE“指纹图谱”,进行病原菌的分型鉴定。 目前中国的PulseNet包括中国CDC流行病所的PulseNet和食品安全所的FoodNet两个功能单位。 CHEF-DR III 脉冲场电泳系统 CHEF-DR III 脉冲场电泳系统 自动化 ■能召回前一次分离条件,并把它作为默认的实验条件 ■能召回当前电泳条件和电泳程序,如果系统因电泳仪故障而中断,能自动重新启动电泳 用户化 ■指导手册提供大量不同分离范围下的电泳条件样例 应用灵活 ■能在 90-120o 之间的任意角度编程,可分离 100 bp -10 Mb范围内的 DNA 分子 ■可选择特定 DNA 分离范围的最佳电压梯度、转换时间及角度 ■可编程 3 个连续执行的电泳模块 PFGE是一种非常有效的分子分型方法。在国外被广泛应用于很多菌种的分子流行病学研究中。 1、研究菌株之间的遗传差异。 2、细菌分型还能对病人的诊断和治疗提供线索 3、用于抗生素敏感株和多重耐药菌株的分子分型,如耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌和耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)。 4、对生活环境中分离的菌株和病人中分离菌株进行相关性分析。 5、PFGE还可用于其他领域,如百日咳抗原性变异和PFGE的相关性 脉冲场电泳在细菌耐药性中的应用实例 鸡源沙门菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究 16株沙门菌经Xba I酶切,PFGE后,每个菌株产生10条~15条电泳条带,大小在20 kb~1 200kb之间: 脉冲场电泳在细菌耐药性中的应用实例 禽源阿贡纳沙门氏菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究: * BIO-RAD CHEF-DR III 脉冲场电泳系统 仪器的外观如图所示: 仪器组成: 主机、电泳槽、循环泵和冷却器。 脉冲场电泳的应用 PFGE 技术在以下方面有广泛的应用 : 癌症研究, 应用脉冲场技术研究放、化疗的效果和细胞程序性死亡的监测 食品安全和公共卫生, 细菌和真菌的传播可以通过脉冲场技术来追踪 质量控制,啤酒厂、酒厂等利用酵母发酵的企业的质量控制 基因做图,包括人类等许多生物的图谱,以及染色体重排的研究。 在细菌中的应用 光学系统 变异分化的本质即 DNA 序列的改变 方法的发展成熟为监测控制细菌的流行提供了广阔的 前景。通过分型可以鉴定比较菌株是否一致, 对于细菌性传染病监测、传染源 追踪、传播途径调查和识别等暴发调查有着非常重要的意义。 细菌的变异分化的本质即DNA序列的改变,脉冲场电泳发展成熟,是监测控制细菌的流行变异的主要研究手段。 通过分型可以鉴定比较菌株是否一致,对于细菌性传染病监测、细菌耐药性检测、传染源追踪、传播途径调查和识别等暴发调查有着非常重要的意义。 对于细菌耐药性研究,可以通过脉冲场凝胶电泳技术对细菌进行基因型分型,结合血清学试验和药物敏感试验进行分析。 *
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