生物制药 细胞工程单克隆抗体.ppt

理想的抗体药物的性质 高特异性和高亲和力（Kd=108~1010L/M） 对人没有免疫原性，不诱导HAMA反应 游离抗体不激活补体 一旦结合到靶抗原上，能诱导效应功能 细胞系稳定，适合在无血清培养基中进行 大规模培养 抗体符合生物制品标准 目前我国抗体药物发展的瓶颈 规模化动物细胞培养技术 工程抗体高效表达系统 今后抗体药物发展的方向 寻找新的靶抗原 基于抗原立体结构设计抗体 基于抗原-抗体相互作用设计小分子抗体 模拟物 人源抗体制备技术日臻成熟，全分子人抗体研究具有诱人的前景，临床应用有望进一步扩大，我国在抗体工程研究中应注重原创性，力争在国际竞争中占有一席之地。 可用单抗治疗的疾病 移植排斥 肿瘤 自身免疫病 心血管疾病 感染性疾病 过敏性疾病 * 米尔斯坦（Cesar Milstein）和克勒（Georges Kohler）发明单克隆抗体技术（1984年医学奖）。 抗体融合蛋白 抗人Her2/neu单抗-IL-2 CTLA-4-Ig 抗纤维蛋白-ProUK 抗活化血小板-UK 双功能抗体作用原理 BsAb BsAb 效应细胞 靶细胞 触发受体 膜表面分子 NK细胞 CD16 肿瘤细胞 HER2/neu 抗HER2/neu×抗CD16 BsAb BsAb 双特异性抗体介导的杀伤作用机制 （a), BsAb桥连效应细胞和靶细胞；(b), 连接的触发分子启动细胞毒反应；(c) , 效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。 细胞毒反应 细胞内抗体：在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体 细胞核 EGFR EGFR EGFR 目前细胞内抗体的研究主要集中在单链抗体上，在ScFv的C端或N端插入其它靶向信号（targeting signals），如分泌信号、核定位信号、线粒体定位信号和内质网滞留信号等，从而进行检测、识别、发挥特定功能。 细胞内抗体 细胞内抗体的作用机理 阻断靶蛋白的活性部位 阻断细胞内蛋白－蛋白相互作用 干扰细胞内靶蛋白的转运 促使靶蛋白降解 细胞内抗体的应用： 由于细胞内抗体具有高亲和力及选择结合特性，因而可通过多种机制调控细胞的生理过程及代谢。主要为： 分子功能的研究 下调生长因子受体的表达 抑制细胞内癌蛋白的活性 抑制病毒复制，如 抗HIV 外壳蛋白 gp120抑制艾滋病毒复制 细胞内抗体广泛应用前存在的问题： 基因转移系统的建立，特别是体内基因转移时基因的靶向传递的问题，使细胞内抗体基因导入充足数量的靶细胞中； 细胞内抗体基因的持久表达及使细胞内抗体达到一定的浓度； 细胞内抗体应无毒及不具免疫原性。鼠源性ScFv可引起人体发生细胞毒性T-细胞反应。应用人源性或人源化抗体可克服此问题。 抗体的ADCC和CDC效应 提高ADCC和CDC的策略 抗体Fc突变 改变抗体糖基化 Rituximab Fc的三维结构 Rituximab突变体与C1q的结合 主要研究进展 靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他 提高表达量的方法 应用扩增系统 GS/DHFR 弱化选择标记基因 应用有利于基因表达的元件 强启动子 强增强子 反式作用元件 位置效应（position effects) Cre-LoxP定点整合系统 抗体的糖基化 主要研究进展 靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他 抗体可变区和框架区的影响 抗体稳定性 可溶性 折叠动力学 表达 PEG化的抗体或抗体片段 重组多克隆抗体 重组多克隆抗体 优点： 可大量生产，批间稳定性好 结合抗原的亲合力高 识别多个抗原表位，对复杂靶抗原的 治疗效果好 对于易变的抗原也能有效 二、单克隆抗体的应用 1.医学检验试剂： ①传染病的快速诊断 ②寻找TSA及检测TAA ③免疫细胞抗原检测 ④激素测定 ⑤血中药物浓度监测 ⑥HLA分型监测 2.导向治疗作用 3.抗原物质的分离和提纯 抗体靶向的酶前药治疗 ADEPT antibody directed enzyme rodrug therapy  -S-S- 药物前体(无毒) 抗体与酶分子偶联 Tumor cell 毒性药物 2、ADEPT体系的构成要素 ①抗体 选择有效靶抗原：肿瘤细胞表面表达，分泌进入肿瘤细胞间质，常出现在血浆中，竞争 以具有不同的抗原