革兰氏染色镜检的操作规程.docVIP

PAGE PAGE 51 化验室标准操作规程 编号：zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程 第 1 页 共 3 页 起草人 庄红梅 起草日期 2005．12 生效日期 2005.12 审核人 张庆芳 审核日期 2005．12 颁布后重审日期 2005.12 批准人 许清泉 批准日期 2005．12 颁布部门 检验科 颁布部门 走马岭中心卫生院 革兰氏染色镜检的操作规程 1.目的：鉴定G阳性菌.G阴性菌（球菌、杆菌、真菌）。指导临床用药。 2.原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gtam所创立的，此方法可将所有的细菌分G+和G-两大类，G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染性的颜色。 3.实验器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。 4.试剂： 4.1试剂来源：购买，四川迈克。 4.2试剂合组成: R1结晶紫1χ10ml R2碳酸钠1χ10 ml R3碱性碘液 1χ10ml R4丙酮酒精1χ20ml R5碱性复红1χ10ml 5.标本采集与处理： 5.1阴道,子宫等分泌物应由医生采集,收集于无菌试管内送检。 5.2载玻片的预处理: 5.2.1载玻片用前以９５％乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片。 5.2.2在玻片背面一端的1/3处注明编号。 5.3涂片： 5.3.1用棉签可直接在玻片上均匀涂抹. 5.3.2菌液涂片时,用接种环沾取菌液,点在玻片上. 化验室标准操作规程 编号：zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程 第 2 页 共 3 页 起草人 庄红梅 起草日期 2005．12 生效日期 2005.12 审核人 张庆芳 审核日期 2005．12 颁布后重审日期 2005.12 批准人 许清泉 批准日期 2005．12 颁布部门 检验科 颁布部门 走马岭中心卫生院 5.3.3菌落涂片时,先取生理盐水一滴置玻片上,用接种针挑取菌落,在盐水中涂布。 6.染色方法: 6.1将标本均匀涂布于玻片上,自然干燥,火焰固定。 6.2冷却后加R1、R2各两滴初染30秒后水洗。 6.3用R3媒染30秒.水洗后用R4脱色至无兰色脱落为止(约有5-10秒),水洗。 5.4用R5复染5秒,水洗,待干,镜检。 7.镜检: 7.1取已干燥的涂片,用低倍镜览片,再用高倍,最后用油镜观察,并在已干燥的涂片滴1-2滴香柏油,仔细观察. 7.2判断菌体的革兰氏染色反应性,呈紫色为G+菌,呈红色为G-. 8.报告方式: 检出革兰氏阳性球菌,革兰氏阳性球菌. 检出革兰氏阴性球菌，革兰氏阴性球菌。 9.实验完后的处理: 9.1显微镜头的处理:用擦镜纸将油镜头的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次.注意向一个方向擦拭. 9.2废弃标本和污物的处理: 9.2.1染色玻片放入5%84消毒液中浸泡30-60分钟,消毒液要每天更换. 9.2.2废弃标本及污物应弃于有盖的污物桶内,由专人收并送焚烧炉内彻底焚化. 10.注意事项: 10.1涂片应均匀,厚薄适度,自然干燥后再加热固定. 10.2脱色要至无兰色脱落为止. 化验室标准操作规程 编号：zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程 第 3 页 共 3 页 起草人 庄红梅 起草日期 2005．12 生效日期 2005.12 审核人 张庆芳 审核日期 2005．12 颁布后重审日期 2005.12 批准人 许清泉 批准日期 2005．12 颁布部门 检验科 颁布部门 走马岭中心卫生院 10.3复染时间不可过长,以免细菌均染成革兰氏阴性,定期检查各 种染液质量,以免发生误差. 11.临床意义. 11.1鉴别细菌 11.2选择药物 12.参考文献: 全国临床检验操作规程(中华人民共和国卫生部医政司) 修改状态/日期 修 改 记 录 修改代号 修改单号 修改人/日期