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实验五 显微镜的使用 和细菌的运动性观察 一、目的要求 了解普通光学显微镜的构造和原理，熟悉其正确的使用方法。 学习并掌握油镜的使用方法，学会用压滴法或悬滴法观察细菌运动性的基本技术。 二、实验原理 （一）普通光学显微镜的构造： 1. 机械部分：镜座、镜臂、载物台、粗细调节器、物镜转换器、镜筒等。---支持、调节、固定等作用 2. 光学系统：目镜、物镜、聚光器、照明装置等。 2.显微镜的分辨率 : 表示显微镜辨析物体（两端）两点之间最小距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 NA，即numerical aperture，是物镜的参数之一 ?：入射光的波长（可见光平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 （二）鞭毛是细菌的运动器官 三、实验材料 显微镜、香柏油、醇醚溶液（或二甲苯）、擦镜纸、吸水纸等。 细菌三种形态的染色标本。 培养12—18h的大肠杆菌或枯草杆菌。 盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。 显微镜（油镜）的使用： 1、用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2、打开光源，调节光亮度 3、低倍镜观察：粗调、细调 4、依次再进行中倍、高倍观察 5、油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 6、换片：另换新片，必须从第3条开始操作。 7、用后复原：观察完毕，上旋镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 （二）细菌运动性的观察 （1）涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林或香柏油。 （2） 滴加菌液：加1滴生理盐水于盖玻片的中央，用接种环从斜面中挑取适量菌点加到水滴中（注意不要涂抹）。 （3） 盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。 （4） 镜检??先用低倍镜菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜、油镜进行观察。由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。 （1） 滴加菌液：加1滴生理盐水于载玻片的中央，用接种环从斜面中挑取适量菌点加到水滴中（注意不要涂抹）。 （2） 盖盖玻片： （3） 镜检： 五、结果与思考题 1. 绘出油镜下观察到的任何一种基本形态的细菌，并说明油镜观察应注意什么问题？ 2. 油镜观察时，为什么要滴加香柏油？ * * * 显微镜的性能参数： 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 四、实验步骤 (一) 结合标本片的观察，掌握油镜的使用方法；观察各类微生物染色片，边观察边绘图。 1 悬滴法： 2 压滴法：
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