测定叶绿素a和b的方法及其计算.pdfVIP

实 验 二 十 五 测 定 叶 绿 素 a 和 b 的 方 法 及 其 计 算 一 目 的 要 求 ： 熟 悉 在 未 经 分 离 的 叶 绿 体 色 素 溶 液 中 测 定 叶 绿 素 a 和 b 的 方 法 及 其 计 算 。 二 实 验 原 理 ： 如 果 混 合 液 中 的 两 个 组 分 ，它 们 的 光 谱 吸 收 峰 虽 然 有 明 显 的 差 异 ，但 吸 收 曲 线 彼 此 有 些 重 叠 ， 在 这 种 情 况 下 要 分 别 测 定 两 个 组 分 ， 可 根 据 Lambert-Beer 定 律 ， 通 过 代 数 方 法 ， 计 算 一 种 组 分 由 于 另 一 种 组 分 存 在 时 对 光 密 度 的 影 响 ， 最 后 分 别 得 到 两 种 组 分 的 含 量 。 如 图 z-4 叶 绿 素 a 和 b 的 吸 收 光 谱 曲 线 ，叶 绿 素 a 的 最 大 吸 收 峰 在 663nm ，叶 绿 素 b 在 645nm ， 吸 收 曲 线 彼 此 又 有 重 叠 。 图 z-4 叶 绿 素 a 和 b 的 吸 收 光 谱 曲 线 横 坐 标 为 波 长 （nm ） ， 纵 坐 标 为 比 吸 收 系 数 根 据 Lambert-Beer 定 律 ， 最 大 吸 收 光 谱 峰 不 同 的 两 个 组 分 的 混 合 液 ， 它 们 的 浓 度 C 与 光 密 度 OD 之 间 有 如 下 的 关 系 ： OD1=Ca ·ka1+Cb ·kb1 （1 ） OD2=Ca ·ka2+Cb ·kb2 （2 ） 式 中 ： Ca 为 组 分 a 的 浓 度 ， g/L 。 Cb 为 组 分 b 的 浓 度 ， g/L 。 OD1 为 在 波 长 λ 1 （即 组 分 a 的 最 大 吸 收 峰 波 长 ）时 ，混 合 液 的 光 密 度 OD 值 。 OD2 为 在 波 长 λ2 （即 组 分 b 的 最 大 吸 收 峰 波 长 ）时 ，混 合 液 的 光 密 度 OD 值 。 ka1 为 组 分 a 的 比 吸 收 系 数 ，即 组 分 a 当 浓 度 为 1g/L 时 ，于 波 长 λ 1 时 的 光 密 度 OD 值 。 kb2 为 组 分 b 的 比 吸 收 系 数 ， 即 组 分 b 当 浓 度 为 1g/L 时 ， 于 波 长 λ2 时 的 光 密 度 OD 值 。 ka2 为 组 分 a （浓 度 为 1g/L ） ， 于 波 长 λ2 时 的 光 密 度 OD 值 。 kb1 为 组 分 b （浓 度 为 1g/L ） ， 于 波 长 λ 1 时 的 光 密 度 OD 值 。 从 文 献 中 可 以 查 到 叶 绿 素 a 和 b 的 80% 丙 酮 溶 液 ，当 浓 度 为 1g/L 时 ，比 吸 收 系 数 k 值 如 下 ： 波 长 （nm ） 叶 绿 素 a 叶 绿 素 b 663 82.04 9.27 645 16.75 45.60 将 表 中 数 值 代 入 上 式 （1 ） 、 （2 ） ， 则 得 ： OD663=82.04 ×Ca+9.27 ×Cb OD645=16.75 ×Ca+45.60 ×Cb 经 过 整 理 之 后 ，