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- 2019-11-02 发布于安徽
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三、宏基因组文库筛选 1、 功能驱动的筛选 2、 化合物结构水平的筛选 3、 序列驱动的筛选 4、 底物诱导的筛选 1 功能驱动的筛选 功能驱动的筛选(Function-driven screening)即基于活性的筛选。 是根据重组克隆产生的新活性而进行筛选的方法。 优点:只要基因能在宿主中表达,就可以根据基因表达特性进行筛选,能迅速找到可用于工农业和医药业的酶等蛋白质和抗生素等天然产物; 缺点:目的基因必须能在宿主中进行功能表达,而基因表达与否除了和宿主有关外,还决定于基因本身的完整性,这就要求一方面要选择合适的宿主菌株,另一方面要求克隆到基因或基因簇的全长,一旦克隆过程中基因的某个组件遭到破坏将使基因无法表达,也就不能根据表型加以筛选。筛选工作量大、效率低。 2 化合物结构水平的筛选 化合物结构水平的筛选(Screening on compound structure)是根据不同结构的物质在色谱中有不同的吸收峰值,通过比较转入和未转入外源基因的宿主细胞或发酵液抽提物的色谱图,筛选产生新结构化合物的克隆子。 这一方法可直接筛选到新结构化合物,但不一定有生物活性,且工作量大、成本高。 3 序列驱动的筛选 序列驱动的筛选(Sequence-driven screening)是根据已知功能的基因序列设计探针或PCR引物,通过核酸杂交或P
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