第九章紫外—可见分光光度法（UltravioletandVisible.ppt

电磁波谱 光的互补性与物质的颜色 分子的光吸收机理 E=h?v=h(C/?) 　分子的吸收光谱是与其相应的电子能级特征相关的。同时也与振动和转动能级有关。 显示器(display) 显示器是将检测器检测的信号显示和记录下来的装置。在分光光度计中常用的是微安表、数码显示管等。简单的分光光度计多用微安表。在标尺上有透光度（T）和吸光度（A）两种刻度，由于吸光度和透光度是负对数关系，因此透光度的刻度是均匀的，而吸光度的刻度是不均匀的。 双光束型 光电二极管阵列型（DAD) 标准曲线法 其方法是先配制一系列浓度不同的标准溶液，用选定的显色剂进行显色，在一定波长下分别测定它们的吸光度A。以A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制A-c曲线，若符合朗伯—比尔定律，则得到一条通过原点的直线，称为标准曲线。然后用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，便可从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量，这就是标准曲线法。 在仪器、方法和条件都固定的情况下，标准曲线可以多次使用而不必重新制作，因而标准曲线法适用于大量的经常性的工作。 9.4.1 显色反应及显色剂： 这种被测元素在某种试剂的作用下，转变成有色化合物的反应叫显色反应（color reaction），所加入试剂称为显色剂(color reagent)。 常见的显色反应大多数是生成配合物的反应，少数是氧化还原反应和增加吸光能力的生化反应。 双波长分光光度法 导数分光光度法 导数分光光度法的应用 有机化合物构型构象的判断 有机化合物构型确定图例 紫外标准光谱图及有关手册 “Sadtler Standard Spectra(Ultraviolet)” Heyden,London,1978. “Ultraviolet Spectra of Aromatic Compounds” Wiley,New York,1951. “Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds” New York, Plenum,1967 “Oranic Electronic Spectral Data” 9.3.2 分光光度测定的方法 Blank Standard Sample Sample 标准对照法(直接比较法) 将试样溶液和一个标准溶液在相同条件进行显色、定容，分别测出它们的吸光度，按下式计算被测溶液的浓度。 k标=k测 b标=b测 所以 要求A与c线性关系良好，被测样品溶液与标准溶液浓度接近，以减少测定误差。用一份标准溶液即可计算出被测溶液的含量或浓度，方便，操作简单。 3．吸光系数法 在没有标准品可供比较测定的条件下，按文献规定条件测定被测物的吸光度，从样品的配制浓度、测定的吸光度及文献查出的吸光系数即可计算样品的含量，因为 则样品含量 例9-4 已知维生素B12在361nm条件下a标=20.7L·g－1·cm－1。精确称取样品30mg，加水溶解稀释至1000mL，在波长361nm下，用1.00cm吸收池测得溶液的吸光度为0.618，计算样品维生素B12的含量。 解： A=a样bc 则 维生素B12的含量= 显色剂 9.4 显色反应及其影响因素 显色反应的要求： ·选择性好 所用的显色剂仅与被测组分显色而与其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。 ·灵敏度要足够高 有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有104~105数量级。 ·有色配合物的组成要恒定 显色剂与被测物质的反应要定量进行，生成有色配合物的组成要恒定。 ·生成的有色配合物稳定性好 即要求配合物有较大的稳定常数，有色配合物不易受外界环境条件的影响，亦不受溶液中其它化学因素的影响。有较好的重现性，结果才准确。 ·色差大 有色配合物与显色剂之间的颜色差别要大，这样试剂空白小，显色时颜色变化才明显。 9.4.2 影响显色反应的因素 显色剂的用量 显色反应一般可表示为 M+R MR 溶液的酸度 许多显色剂都是有机弱酸或有机弱