RNi技术原理及应用.pptVIP

Title Title Title In feeding experiments most sequences range between 300 and 520bp，But In the case of S2 cells, it should be minimally 211bp. The sequence used will determine possible off-target effects in the target organism, but also in other insects. The persistence of the silencing effect depend on the delivery ways and the organisms. For every target gene and organism an optimal concentration has to be determined to induce optimal silencing. Although older life stages are more efficient for handling, the younger stages often show larger silencing effects. Concentration Nucleotide sequence Length of the fragment Persistence Of the effect Life stage of the organism 4.3RNAi技术在害虫控制的应用 5.1 Five important factors largely influencing the silencing effect 1.靶标基因沉默导致害虫死亡 Bettencourt等(2002)利用RNAi技术对刻克罗普斯蚕蛾（Hyalophora cecropia）的抑血细胞聚集素基因（Hemolin）进行研究，发现RNAi后雌虫交配产卵，由于胚胎畸形，不能够孵化出幼虫。 R. Bettencourt*, O. Terenius and I. Faye (2002) Table 4. Impact of parent male RNAi on embryonic malformation Parent male treatment No embryo Severely malformed Malformed Fully developed but not hatched Total RNAi? (n = 3) 27 24 37 6 94 Untreated? (n = 3) 5 23 34 26 88 2.转基因植物持续提供dsRNA Baum et al. (2007)对玉米进行了基因改造，使其液泡表达玉米根萤叶甲（Diabrotica virgifera virgifera）的一种关键酶(V-ATPase)为靶标的dsRNA，结果表明能够减轻害虫对植物的危害。 Non-transgenic corn Transgenic corn (Baum et al., 2007) Mao等（2007）将棉铃虫（H .armigera）的细胞色素P450基因(CYP6AE14) 转入植物烟草Nicotiana tabacum 和 拟南芥Arabidopsis thaliana中。棉铃幼虫取食转基因叶片后，其中肠细胞色素P450基因表达量显著降低，幼虫生长缓慢，甚至死亡（Mao et.al. ，2007） * 50-80ug或更多1.2kb dsDNA一次转录反应 有U否？无 RNAi技术原理及其应用 2013.10.15 什么是RNA干扰？ RNA干扰( RNA interference , RNAi )是指由与靶基因序列同源的双链RNA (double-strand RNA，dsRNA)所诱导的mRNA特异性降解，从而使基因转录后沉默的一种现象(Fire A,2002)。 2002年美国《科学》杂志将其评为全球年度十大科学进展之首 1 RNAi现象的发现及发展 RNAi的发现 转录水平 转录后水平 基因沉默 DNA甲基化 异染色质形成 DNA分子的消融 siRNA介导 miRNA介导 2 RNAi的作用机制 2.1转录水平的基因沉默 RNA分子介导的转录水平的基因沉默（transicriptional gene silencing，TGS）是指基因信息从DNA到mRNA的转录过程尚未启动时，siRNA分子通过修饰染色体DNA分子或与其结合的组蛋白分子阻碍转录的发生 2.2转录后水平的基因沉默 RNA分子