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特定样品制备关键点解析 作科所电镜室 吴佳楠 2019年7月25日 01 取材 及方法 02 固定液 浓度 03 辅助试剂 添加 04 特定样品 举例 部位 大小 方式 温度 时期 有表型的最早期 4℃取材+避光保存 固定液中刀片切割+镊子轻挑 1mm2-1.5mm2 关键目标部位 2%-6% 戊二醛 01 细胞壁较厚：2.5%GA+4%PFA 02 含水量较大：4%GA+4%PFA 03 灌注固定：0.5%GA 04 常用：2.5%-3%GA 提高固定效果 改善渗透压（适中） 提高固定液的透过性 （细胞壁厚） 1%Triton、0.2M蔗糖 kcl、Nacl、Cacl2 1、观测结构：叶绿体、线粒体 2、取样时间：上午；若需观测淀粉粒，下午取样 3、取样部位：除去大叶脉和叶边缘 4、取样方式：双面刀片与预冷固定液中垂直切取（忌撕扯、揉搓） 注意：若叶片表皮蜡质、绒毛等影响抽真空效果，可使用75%乙醇或丙酮擦拭表面5s左右。 1、由于根尖泌酸的生理特性，固定效果因区域而不同。 2、分生区：细胞致密，活跃性高、细胞内含物较多，固定难度较大，超微结构清晰度较差，采用2.5%GA+4%PFA，可适量添加0.2M蔗糖或0.1%Triton。 3、伸长区和成熟区：按照常规固定方法即可。 注意：不同区域在取样时要分开，伸长区可以和成熟区一起，但是两个部分能观测的区域减少。 以水稻为例