白藜芦醇白蛋白纳米粒的制备及其 抗卵巢癌细胞增殖作用的研究_.docVIP

w w w . s p m . c o m . c n Vol . 30 高 等 学 校 化 学 学 报 No . 32009年 3月 　 　　　　　 CHE M I CAL JOURNAL OF CH I N ESE UN I V ERSI TI ES 　　　　　 　 474~477 白藜芦醇白蛋白纳米粒的制备及其 抗卵巢癌细胞增殖作用的研究 郭莉媛 , 姚晶萍 , 隋丽华 (哈尔滨医科大学附属肿瘤医院妇科 , 哈尔滨 150040 摘要 　 以牛血清白蛋白 (BS A 为载体 , 用去溶剂化 2化 (2BS ANP . 以原子力学显微镜 (AF M 观察其形态 , (LC . 采用四甲基 偶氮唑盐微量酶反应比色法 (MTT 对卵巢癌 SK OV3细胞的 . , 2BS ANP 纳米粒的平均粒径为 400~500nm, 表面光滑 , 41mg, 33197%, 24h 内的稳定性好 , 水溶性较 RES 显 著提高 . , 中高浓度组纳米粒组的抗增殖活性及凋亡细胞比率显著提 高 . G 0/G1+S 期 , 纳米组使进入 S 期细胞比率明显增加 , 表明白藜芦醇白蛋 白纳米粒在抗卵巢癌细胞增殖方面有广阔的应用前景 . 关键词 　 白藜芦醇 (RES ; 牛血清白蛋白 (BS A ; 白藜芦醇白蛋白纳米粒 (RES 2BS ANP 中图分类号 　 O629. 7; R284　　　　 文献标识码 　 A 　　　　 文章编号 　 025120790(2009 0320474204收稿日期 :2008210231. 基金项目 :国家中医药管理局中医药科学技术研究专项课题 (批准号 :06207ZP15 资助 . 联系人简介 :隋丽华 , 女 , 主任医师 , 博士生导师 , 从事妇科肿瘤的分子流行病学及药物研究和综合治疗 . E 2mail:suilihua2003@yahoo. com. cn 多年来的研究已证实 , 天然抗肿瘤药物白藜芦醇对消化 、 血液 、 呼吸 、 生殖等多个系统来源的多 种肿瘤细胞都有拮抗作用 , 在肿瘤细胞的起始 、 促进 、 发展 3个阶段均发挥抑制乃至逆转效应 [1]. 但 白藜芦醇难溶于水 , 能溶于乙醇 、 乙酸乙酯 、 丙酮等 , 人口服白藜芦醇 115mg/kg, 30m in 血药浓度达 高峰 , 120m in 恢复 . 为了增加白藜芦醇的溶解度及改善吸收 [2], 提高生物利用度 , 可将白藜芦醇制成 白蛋白载药微粒 . 随着新型白蛋白溶剂型药物如紫杉醇白蛋白纳米粒 、 阿霉素白蛋白纳米粒等的相继 问世 [3, 4], 多项临床研究已经证实 , 其在乳腺癌等多种肿瘤的治疗中取得突破性进展 [5, 6]. 本文采用去 溶剂化 2化 学交联法制备白藜芦醇白蛋白纳米粒 (RES 2BS ANP , 检测其在体外条件下生物活性的改变 . 1　 实验部分 1. 1　 试剂与仪器 白藜芦醇 (西安华萃生物技术责任有限公司 , 批号 :HC 220070912, 纯度 90% ; 人卵巢癌 SK OV3细胞株 (哈尔滨医科大学肿瘤研究所提供 , BS A 牛血清白蛋白 (东北林业大学生命科学院提 供 ; 小牛血清 (杭州四季青生物公司 ; 1640培养基和胰蛋白酶 (Gbico 公司 ; 二甲亚砜和四甲基偶 氮唑盐 (Sig ma 公司 ; 细胞周期试剂盒 (DNA 2Pre . pStain Kit (Beckmani 2Coulter ; Annexin V 2F I TC /P I 凋亡试剂盒 (Apop t osis Detecti on Kit, B i ovisi on 公司 , 戊二醛及乙醇均为分析纯试剂 . 高压均质机 (Y O 2SH I D A , CSP M2000wt 原子力学显微镜 , JHN2M24E 超声分散仪 . ST A409PC 型综合热分析仪 , 高效液 相色谱仪 (W aters 公司 , E L I TE ESP 型流式细胞仪 . W ellscan MK3全自动酶标仪 . 1. 2　 实验过程 1. 2. 1　 白藜芦醇白蛋白纳米粒的制备 　 取 10mg BS A 溶于 1mL 二次蒸馏水中 , 将 12mg RES 溶解于 6mL 无水乙醇中 , 然后逐滴将 RES 的无水乙醇溶液加入到 BS A 水溶液中 ; 加入 25μL 质量分数为 w w w . s p m . c o m . c n 0125%的戊二醛溶液 , 搅拌 8h . 取 500μL 搅拌均匀的混悬液离心 (1000r/min , 上清液用 HP LC 法检 测包被率 . 剩下的混悬液旋转蒸发除去乙醇 , 加入二次蒸馏水后超声清洗 20m in, 离心 (1000r/min