ch04-3碳水化合物的测定.pptVIP

第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （二）酶水解法 如含有上述非淀粉成分物质较多的麸皮、米糠、粗淀粉应选用酶水解法：样品经除去脂肪和可溶性糖类后,在淀粉酶的作用下,淀粉水解为麦芽糖和低分子量的糊精（水溶性）,过滤后,再用盐酸将双糖进一步水解成葡萄糖,然后用还原糖法测定,并折算成淀粉含量。 1. 适用范围及特点 本方法不受半纤维素、多缩戊糖、果胶质等多糖的干扰,适合于这类多糖含量高的样品,分析结果准确可靠,但操作复杂费时。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （二）酶水解法 2. 试剂 碘溶液(试剂)：3.6 g碘化钾溶于20 mL水中,加入1.3 g碘,溶解后加水稀释至100 mL。(顺序不能错)贮于棕色瓶中,否则变为氢碘酸。 问：为什么不直接用碘溶液,而需要加入碘化钾？ 5 g/L淀粉酶溶液：淀粉酶0.5 g,加水溶解并定容至100 mL,加数滴甲苯或氯仿(防止长霉),贮于冰箱中。 碘在水中的溶解性太差,配成的溶液溶度太低。而加入碘化钾后,发生可逆反应： I- + I2 ≒ I3- I3-兼有I-和I2 的性质,可以看成是I-和I2,因此加入碘化钾后,既不会影响I2的性质,又大幅增加了I2的溶解度 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （二）酶水解法 3.测定方法 样品处理：称样→脱脂→去可溶性糖→定容→过滤→滤液→糊化 称m=2.00~5.00 g试样于放有折叠滤纸的漏斗内,用50 mL乙醚分5次洗去试样中脂肪,弃去乙醚。再用85%乙醇100 mL分数次洗涤残渣,除去可溶性糖类。滤净乙醇,将残留物移入250 mL烧杯内,用50 mL水洗涤滤纸及漏斗,滤液并入烧杯内,将置沸水浴内加热15min使淀粉糊化,冷却至60℃以下备用。 酶水解：加入20 mL淀粉酶溶液, 55℃~60 ℃保温水解1h,及时搅拌。然后取1滴此液加1滴碘溶液(验证水解程度),若显蓝色则再加热糊化并加继续保温,直至加碘不显蓝色为止。加热至沸(杀酶),冷却后移移入250 mL容量瓶中,加水定容混匀,过滤,弃去初滤液。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （二）酶水解法 3.测定方法 酸水解：取50 mL滤液于250 mL锥形瓶中,加5 mL盐酸(1+1),装上回流冷凝器,沸水浴中回流水解1h,冷却后加2滴甲基红,用20%氢氧化钠溶液调pH值至中性,定量转入100 mL容量瓶中,加水定容,混匀备用。 测定及结果计算：按还原糖测定方法进行,下式中m1、m2分别为试样及试剂空白试验时测得(与10mL碱性铜盐试剂相当的)还原糖毫克数,V为测定用试样处理液的滴定体积,mL。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （三）旋光法 1.原理 淀粉分子具有不对称碳原子,因而具有旋光性,可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。 溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30,密度须为1.30,加热时间的长短也要控制在一定范围。因为只有在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋度[α]才都是203°,恒定不变。样品中其他旋光性物质(如糖分、蛋白质)须预先除去(用乙醚脱脂、乙醇脱糖、氯化锡沉淀蛋白质)。酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解,同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合,使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （三）旋光法 2.应用范围及特点 本法适用于淀粉含量较高,而可溶性糖类含量很少的谷类样品,如面粉、米粉等。方法操作简便、快速。 普通淀粉的比旋光度常用203计,豆类淀粉200计。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （三）旋光法 3.测定方法 样品粉碎→称样(含淀粉约2 g)→(脱脂、钝酶、脱糖)加水→加氯化钙提取→煮沸15min →急冷→转移→加氯化锡沉淀杂质→定容(以氯化钙溶液)→过滤→测旋光度 4. 结果计算 α——用钠光时观测到的旋光度；淀粉的比旋度203°； L——旋光管长度(cm)；m——样品质量(g)； 也可以不用上列公式计算,改用工作曲线来求得淀粉含量,这样准确度高些。 第3节 淀粉的测定 三、淀粉的测定方法 （四）其他方法 1.称量法 把样品与氢氧化钾酒精溶液共热,使蛋白质、脂肪溶解,而淀粉、粗纤维不溶。过滤后,用氢氧化钾溶液溶解淀粉,使之与粗纤维分离。然后用酸性乙酸（用乙酸酸化）使淀粉重新沉淀,过滤、洗涤（乙醇）、干燥（105℃）,扣除灰分后即为淀粉