副溶血性弧菌生物被膜培养条件及优化.pdfVIP

副溶血性弧菌生物被膜的形成与优化 渠宏雁 孟良玉 刘锦峰 蔡文倩 卢佳琨 张霞 兰桃芳 励建荣 （渤海大学化学化工与食品安全学院，辽宁省食品安全重点实验室， 辽宁省高校重大科技平台“食品贮藏加工及质量安全控制工程技术研究中心” 辽宁锦州 121013 ） 摘要 本文主要探讨了各种环境因子对副溶血性弧菌生物被膜形成的影响，旨在为以后控制 细菌形成生物被膜提供依据。选用副溶血性弧菌为研究对象，采用微孔板检测法，用酶标 仪测得的OD630值确定副溶血性弧菌生成生物被膜的最佳条件。试验结果表明：起始细菌浓 度7 logcfu/mL、培养温度28 ℃、培养基NaCl含量3% 、培养基起始pH 8~9时，测得的OD630 值最大；培养基中分别加入蔗糖、乳糖、葡萄糖，OD630值均增加，且均在含量2% 时促进 效果最明显；培养基未稀释时，测得的OD630值最大，且随着培养基稀释度的增加而减小； 培养基中添加Ca2+促进生物被膜的形成而添加Mg2+ 、Cu2+ 、Fe3+对生物被膜的形成有抑制作 用。因此，副溶血性弧菌能形成稳定而明显的生物被膜，且生物被膜的形成受温度、NaCl 浓度、pH值等环境因子的影响。 关键词 副溶血性弧菌；生物被膜；优化 细菌生物被膜(Bacterial biofilm,BF)是指附着于生命或无生命物体表面被细菌胞外大分 子包裹的有机组织的细胞群体。它们是细胞间相互协调，以多细胞群体形式组成的复杂结 [1-4] 构，是许多微生物适应外界环境的一种生活方式 。据世界卫生组织估计，全世界每年数 以亿计的食源性疾病患者中有 70%是由于食用各种致病性微生物污染的食品和水源造成的 [5] [6] 。根据美国CDC 统计，大约 65% 的人类细菌性感染是由 BF 细菌引起的 。大量研究证 实，几乎所有的细菌都可形成生物被膜。形成生物被膜被认为是导致食品加工环境中细菌 [7-9] 持续存在的一个主要原因 。 基金项目：“十二五”国家科技支撑计划（课题编号：2012BAD29B06 ）；辽宁省食品安全重点实验室暨辽 宁省高校重大科技平台“食品贮藏加工及质量安全控制工程技术研究中心”开放课题 （LNSAKF2011020 ）。 作者简介：渠宏雁，(1988—），女，硕士研究生 *通讯作者：励建荣 副溶血性弧菌 （Vibrio Parahaemolyticus, VP）隶属于弧菌科弧菌属，为革兰氏阴性嗜 [10] 盐性海洋细菌 ，该菌主要存在于近海岸的养殖海域、海底沉积物和鱼、虾、贝等海产品 中，是海水养殖中的一种重要条件致病菌，也是我国沿海地区食物中毒和夏季腹泻的重要 [11-12] [13] 病原 ，已经高居微生物性食物中毒首位 。 因此非常有必要搞清副溶血性弧菌生物被膜形成条件，可以有针对性地控制其在食品 及环境中的形成。本文通过初步探讨环境因素对副溶血性弧菌生物被膜形成的影响，以期 为控制副溶血性弧菌生物被膜的形成提供一定的理论依据。 1. 材料与方法 1.1 材料 菌种：副溶血性弧菌 （Vibrio Parahaemolyticus, VP）：ATCC17802 ，购自中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心。培养基：3%氯化钠碱性蛋白胨水(APW) 。主要试剂： NaCl，冰醋酸，结晶紫，NaOH。主要仪器：BCM- 1000A 型生物洁净工作台，苏州净化过 滤设备有限公司；SC-303 型电子管电热恒温培养箱，浙江省嘉兴县新腾电器厂；SLJ-I 型 中型电动离心机，沈阳市红星五金电器厂；DG5031 型酶标仪，华东电子集团医疗装备有 限责任公司；DHG-9075A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司。 1.2 方法 1.2.1 增菌培养 将活化的菌种接种于APW 液体培养基中，28 ℃孵育48h ，低温高速离心(10000r/min， 10min)。弃去上清液，收集菌体，用无菌生理盐水保存于4 ℃冰