生物化学与分子生物学八年制课件25电子教案.ppt

DNA链末端合成终止法 DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸（或同一测序引物），然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 目的基因 载体 限制性内切酶 限制性内切酶 T4 DNA连接酶 重组体 载体自连 目的基因 自连 （二）平端连接效率较低 为了提高连接效率，可采用提高连接酶用量、延长连接时间、降低反应温度、增加DNA片段与载体的摩尔比等措施 平端连接同样存在载体自身环化、目的DNA双向插入和多拷贝现象等缺点 （三）粘-平末端的连接效率介于黏端和平端连接之间 粘-平末端连接是指目的DNA和载体之间通过一端为黏端、另一端为平端的方式进行连接 以该方式连时，目的DNA为定向插入载体（即定向克隆） 该连接方式的连接效率介于黏端和平端连接之间 可采用提高平端连接效率的措施来提高该方式的连接效率 （四）快速连接法无需纯化DNA片段 该方法从低融点琼脂糖凝胶中直接切下所需的DNA片段，无需纯化，连同凝胶一起与载体DNA进行连接。本法省时省力，对DNA黏端和平端的连接均适用，但其连接效率明显低于常规连接，且DNA连接酶用量大。 四、重组DNA转入受