实验7_植物总DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测.docVIP

. . 植物总DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 （2010级生态班实验方案） 实验目的 理解用CTAB法提取植物组织DNA的原理。 掌握CTAB法提取植物组织DNA的方法。 了解真核基因组DNA的有关特性。 实验原理 由于植物细胞含有细胞壁及其细胞内高含量的多糖物质，因此一般的提取真核细胞基因组DNA的方法用在植物细胞上并不十分有效。十六烷基三乙基溴化铵（cetyltriethy lammonium bromide, CTAB）法是常用的提取植物细胞基因组DNA的方法。CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）时，CTAB-核酸复合物是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸复合物与蛋白质、多糖类物质分开。CTAB-核酸复合物再用70－75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。再经过氯仿/异戊醇(24:1)抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA ，最后经异丙醇或乙醇等 DNA 沉淀剂将DNA沉淀分离出来。 植物DNA的提取程序应包括以下几项：①必须破碎或消化细胞壁释放出细胞内容物；②必须破坏细胞膜及核膜，使DNA释放到提取缓冲液中，常用CTAB一类的去污剂使细胞膜崩解；③DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白质、多糖等杂质，可利用氯仿、RNase等除去。一旦DN