实验五_胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响.pptVIP

原始数据记录 1、实验原理（清晰，全面） 2、原始数据记录 3、实验结果计算（数据带入的过程） 4、实验讨论（讨论实验成败的原因，实验可改良的地方等） * * * * * 实验五. 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 (一)基本原理—激素对血糖浓度的调节 激素是调节机体血糖浓度的重要因素。 胰岛素能促进肝脏及肌肉合成糖原，同时又可加强糖的氧化利用，故可降低血糖； 肾上腺素能促进糖原分解而升高血糖。 实验五. 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 (一)基本原理—葡萄糖氧化酶法(GOD)测血糖浓度 样品中的葡萄糖通过葡萄糖氧化酶（GOD）及过氧化物酶（POD）催化的偶联反应生成红色醌类化合物。通过标准管法比色即可测定样品（血清）中葡萄糖的含量。(P18) (一)基本原理—实验设计 实验五. 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 本实验给两只小鼠分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后鼠尾静脉血，分别测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化。从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。 【步骤1】注射动物—取血—血浆的制备 ① 每实验组取两只小鼠，分别将其套入红、蓝两色套筒中，尾部伸出。红色套筒中的小鼠用于胰岛素实验，而蓝色套筒中的小鼠用于肾上腺素实验； ② 取两只EP管，在管盖处做标记（如：胰岛素In-/肾上腺素Ad-），每管加入5ul肝素(0.5-10ul枪)抗凝剂，用于小鼠取血； ③ 每只小鼠尾部2cm处剪刀断尾，用移液枪（20-200ul）吸取小鼠断尾处的血液，移入EP管中，并轻柔弹击EP管壁混匀。每只小鼠取血量在100ul以上。 取血后在小鼠断尾处涂抹少量凡士林止血。 ? 将上述抗凝全血In-及Ad-放4℃冰箱冷藏备用。（可室温） 1、注射前取血： 【步骤1】注射动物—取血—血浆的制备 ① 正确抓取小鼠，腹腔注射1.0ml的胰岛素及1.0ml的肾上腺素。 ② 注射后将小鼠放回套管中，尾部露出。(可置入鼠笼内) 2、注射动物： 3、注射后取血：（取血时间：肾上腺素30min，胰岛素40min） ① 取两只EP管，在管盖处做标记（In+/Ad+），每管加入5ul肝素抗凝剂备用； ②按前述方法再次断尾取血。每只小鼠取血量在100ul以上。取血后颈椎脱臼法处死小鼠，放入有塑料袋的小红桶内。 【步骤1】注射动物—取血—血浆的制备 4、血浆的制备： ① 将上述抗凝全血（In-、In+/Ad-、Ad+），3000r/min离心5min，小心收集上清，即血浆。 注意：血浆制备过程应防止溶血，移动或操作全血尽量避免剧烈震荡。 血浆或血清 （μl） 葡萄糖标准液（μl） 磷酸盐缓冲液（μl） 酶酚混合试剂（ml） 试剂 取小试管6只，分别标号，按下表配制溶液： 20 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 注射胰岛素前 测定管 注射胰岛素后 注射肾上腺素前 注射肾上腺素后 【步骤2】血糖浓度的测定 20 20 20 20 20 混匀后37℃水浴15min，冷却后以505nm比色，空白管调零，记录各管吸光度。 标准管 空白管 日期，室温，仪器，重要参数 实验项目 【步骤2】血糖浓度的测定 A值 标准管 测定管 血糖浓度 葡萄糖溶液 注射肾 上腺素后 注射肾上 腺素前 注射胰 岛素后 注射胰 岛素前 5 管号 1 2 3 4 Cx = Ax As ? Cs ①标准管: As = K Cs L ②待测管: Ax = K Cx L ③空白管： ①根据Lambert-beer定律： ②因上述公式缺乏实用性，在实际操作中，常使待测管体积与标准管体积相等(以X代表测定管含量，S代表标准管含量)则： Cx *V = Ax As ? Cs*V X = Ax As ? S 稀释液浓度 稀释液浓度 【步骤3】结果计算：标准管法 1、计算注射胰岛素或肾上腺素前后血糖的浓度： 【步骤3】结果计算：标准管法 Cx = Ax As ? Cs ? Vs Vx ③计算待测溶液浓度时，可根据测定时实际吸取的标准液的体积(Vs)和待测样品的体积(Vx)，将上式演变为： X = Ax As ? S = Ax As ? S X ? VX VX 1 ? VS VS 测试母液浓度 标准母液浓度 吸取的标准及测试母液的体积 2、计算注射胰岛素后血糖降低或注射肾上腺素后血糖升高的百分率： 【步骤3】结果计算：标准管法 血糖变化百分率= 注射后血糖浓度—注射前血糖浓度 注射前血糖浓度 X100% 日期、室温 实验项目 【步骤4】实验报告 *