液质联用技术在天然产物分离中的应用.doc

. . 液质联用技术在天然产物分离中的应用 摘要：本文综述了液质联用技术的发展状况，及其组成、特点、和仪器分类，并且总结了它在天然药物成分如黄酮类，生物碱，萜类，香豆素类成分分离分析中的应用。 关键词：液质联用；天然产物；分离 引言 20世纪80年代，质谱技术的发展发生了大的飞跃，出现了很多软电离技术，如快原子轰击电离子源(FAB)，基质辅助激光解吸电离源(MALDI)，电喷雾电离源(ESI)，大气压化学电离源(APCI)。APCI电离源的优势在于分析弱极性或中等极性的小分子化合物，但是不适合大分子研究，主要应用于环境检测和药物分析等研究领域。 ESI适用于中等极性到强极性的化合物，可用于分析在溶液中能事先形成离子的化合物和获得多个质子的蛋白质、肽等大分子化合物。这两种离子源都具备使溶液气化、样品电离等性质，成功地解决了液相色谱和质谱之间的接口问题，使得液质联用技术逐渐发展成为一种成熟的技术[1]。液质联用(LC/MS) 是指液相色谱与质谱串联的技术。HPLC 是目前分离复杂体系最为有效的分析工具， 由于天然药物中含有结构、性质不同的多种复杂成分，而且有效成分的含量往往较低，因此为了深入研究和开发天然药物，必须从复杂的中草药组分中提取、分离鉴定出有活性的单体纯样，由于液质联用仪器自动化、普及化程度愈来愈高， 已成为中药分析最常用的仪器之一[2]。 1液质联用的特点 1.1液质联用仪器的组成 液质联用仪是由HPLC、接口装置、及MS三大单元组成。其中接口装置是关键。API接口是目前商品化LC-MS仪采用最广的接口，主要包括电喷雾电离(ESI)，离子喷雾电离（ISI）和大气压化学电离(APCI)三种操作模式。电喷雾电离及大气压化学电离接口是一项实用、高效的常压“软”离子化技术，具有离子化效率高、离子化模式多样、可测定高分子量蛋白质和热不稳定化合物、易与大流量HPLC联机使用等优点，被人们称为LC-MS技术乃至质谱技术的革命性突破[3]。 1.2液质联用分析的特点 液质联用分析样品的前处理过程简化，使样品分析更简便。对流速和流动相有一定的要求，流动相应使用纯水及色谱纯级试剂，其中禁止使用任何无机酸、卤酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸金属盐、表面活性剂及其它不可热分解为气体的化合物，可使用甲酸、乙酸、甲酸铵、乙酸铵、碳酸氢铵、氨水，慎用氧氟酸。流动相中有必要使用挥发性盐时，其浓度应控制在20mM以内，酸则控制在0.1%以内[4]。HPLC-MS分析进行的关键是液相色谱分析方法的建立及质谱分析条件的优化。质谱分析条件的优化则要根据目标化合物的分子量及结构、结合样品浓度、基质特点及流动相组成，调整质谱扫描范围，优化多级碎裂电压。 1.3常用的液质联用仪器 按照质谱检测器进行分类，目前比较常用的HPLC-MS/MS仪器见表1。 2天然药物 天然产物为我国经济发展与人类健康方面作出了重大贡献。中国现存最早的药学专著《神农本草经》，明朝李时珍编著的《本草纲目》以及清代赵敏学编著的《本草纲目拾遗》就记载了大量的天然药物。在我国，天然药物又被称之为中草药，它与中医一起构成了中华民族文化的瑰宝，是全人类的宝贵财富。天然药物之所以能够防病治病，是因为基于其物质基础的有效化学成分起到了关键作用。由于当今世界国际化进程加速，我们的中药要走向国际市场就必须对其成分进行标准性研究，这就必须借助现代化仪器，而液质联用仪器就是其中的一种，在天然药物成分如黄酮类，生物碱，萜类，香豆素类成分的分离分析中扮演了极其重要的角色。 表1常用的液质联用仪器 质谱检测器 适用范围和特点 单级四级杆质谱仪 适用于基质中无化学背景干扰的定性、定量分析，可通过离子源内CID具有使离子诱导裂解实现“准MS/MS”功能，只能得到低分辨率的质量数 三重串联四极杆质谱仪 可通过其MS/MS功能进行定性分析或用选择反应监测(SRM)模式进行定量分析。在所有的质谱分析仪中，QMS定量分析结果的准确度和精密度最好。 四极离子阱质谱仪 适合于目标化合物、肤及蛋白质的结构解析及确认，但其定量分析能力在动态范围及稳定度上皆不如四级杆质谱 四极杆-飞行时间质谱仪 结合四级杆质谱的高灵敏度和TOF的高分辨率。 傅里叶变换质谱仪 高灵敏度、高精度、高分辨率，在测定化合物时可以准确生成分子式，提供可靠的鉴定结果 2.1黄酮类 黄酮类化合物广泛分布于植物界，并具有较强的生物活性， 例如抗菌作用、抑制癌细胞的生长或抗癌作用、解痉挛作用和降低血压作用等[5]。黄酮类化合物不但在医药上有着广泛的应用而且在日常生活当中可作为功能食品添加剂、天然氧化剂、天然色素和甜味剂等。由于黄酮类化合物重要的药用价值和保健作用， 对于复杂天然产物中的黄酮类化合物进行分离分析对其进一步的研究工作起着指导作用， 同时对于其应用和产品开发也具