梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的.pdfVIP

吉林农业大学学报　 ２０１７，３９（４）：４５４～４５９ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 梅花鹿 ＶＥＧＦ基因的克隆及其在鹿茸顶端组 织的表达∗ 韩香玉，吴　 炎，李　 璐，闫语多，胡　 薇∗∗ 吉林农业大学生命科学学院，长春 １３０１１８ 摘　 要：为了得到ＶＥＧＦ成熟肽基因，利用Ｔｒｉｚｏｌ试剂法提取鹿茸顶端组织总ＲＮＡ，反转录形成ｃＤＮＡ。 根据 ＧｅｎＢａｎｋ 已发表的相关基因序列设计 １对特异性引物，并克隆ＶＥＧＦ 成熟肽基因，再利用免疫组化法检测 ＶＥＧＦ基因在鹿茸顶端不同组织的表达水平。 结果表明：成功获得梅花鹿ＶＥＧＦ 成熟肽基因，该基因长 ４９５ ｂｐ，共编码 １６４ 个氨基酸；经 Ｂｌａｓｔ 同源性分析，结果显示与牛、羊、猪的核苷酸序列的同源性分别为 ９８７９％、９７９８％、９６３６％；经ＤＮＡＭＡＮ软件比对，其氨基酸序列的同源性分别为９８７８％、９７５６％、９６９５％。 免疫组化法结果显示，ＶＥＧＦ在茸皮层、间充质层和软骨层中均有表达，其中在软骨层中表达水平较高。 关键词：梅花鹿；鹿茸；血管内皮生长因子；克隆；免疫组化 中图分类号：Ｑ７８６；Ｓ８２５　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１７）０４⁃０４５４⁃０６ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１７．３４５８ 引文格式：韩香玉，吴炎，李璐，等．梅花鹿ＶＥＧＦ基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的表达［Ｊ］．吉林农业大学学 报，２０１７，３９（４）：４５４⁃４５９． Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ Ｇｅｎｅ ａｎｄＩｔｓＥｘ⁃ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｎｔｌｅｒ Ｔｉｓｓｕｅ ＨＡＮＸｉａｎｇｙｕ，ＷＵＹａｎ，ＬＩ Ｌｕ，ＹＡＮＹｕｄｕｏ，ＨＵＷｅｉ∗∗ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） ｍａｔｕｒｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅ，ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｇｒｏｗｉｎｇａｎｔｌｅｒｔｉｐｔｉｓｓｕｅ．Ａｐａｉｒｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ ＶＥＧＦａｍｏｎｇｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ．ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ ＶＥＧＦｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄ － ｂｙ ＲＴ ＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｗａｓｕｓｅｄｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ ｏｆ ＶＥＧＦ ｉｎ ａｎｔｌｅｒ ｔｉｐ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＶＥＧＦ ｍａｔｕｒｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｉｔ ｈａｄ ４９５ ｂａｓｅ ｐａｉｒｓ ｉｎ ｌｅｎｇｔｈ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ １６４ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＶＥＧＦ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｃａｔｔｌｅ，ｓｈｅｅｐ ａｎｄ ｐｉｇ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ ＶＥＧＦ ｗｅｒｅ ９８７９％，９７９８％ ａｎｄ ９６３６％，ａｎｄｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅ９８７８％，９７５６％ ａｎｄ９６９５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＶＥＧＦｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃｏｒｔｅｘ，ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅａｎｄｃａｒｔｉ⁃