第三章遗传与基因工程.pptVIP

DNA重组技术的基本工具 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程产品 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 资料分析 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” EcoRⅠ限制性内切酶 EcoRⅠ限制性内切酶 黏性末端和平末端 限制酶所识别的序列有什么特点 ? 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 讨论：限制酶在原核生物中的作用 ? 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 DNA连接酶——“分子缝合针” 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？ DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 基因的载体——“分子运输车” 质粒 模拟活动：体验重组DNA分子的操作 思考探究活动 巩固练习 完成导学案相关练习 * * 结果 操作水平 操作对象 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 抗虫害的玉米 转鱼抗寒基因的番茄 转基因鲑鱼 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 基础理论 技术发明 位于费城托马斯·杰斐逊大学的希拉里和她的同事成功地将人体狂犬病抗体的DNA译码移入烟草作物中。  转基因烟草作物可以产生一种人体蛋白质，而这种物质能抗击致命性的狂犬病病毒。 学习探究1：怎样才能在人体DNA分子中的众多基因中找到产生狂犬病抗体的基因呢？又怎样将它从DNA长链中提取出来？又如何将提取出的目的基因与烟草细胞的DNA结合在一起呢？ 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点 切点：磷酸二酯键 举例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 重播 作用结果 作用过程 连接的DNA链 是否需模板 作用实质 DNA聚合酶 DNA连接酶 催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 不需要 需要 双链DNA 单链DNA 在两个DNA片段间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到DNA片段的3’端上，形成磷酸二酯键 将DNA片段连成重组DNA分子 合成新的DNA分子 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 有切割位点 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 学习探究： 1.总结模拟操作成败的关键是什么？ 2、由此推知，要想将目的基因与载体相连，需要用几种限制性内切酶和几种DNA连接酶处理？ 分组进行模拟操作，交流展示