分析组织培养技术.pptVIP

组培苗炼苗 组培苗集约化栽培 * * 培养基的选择：1.无机营养成分：一般在现有培养基配方中选择。例如：MS是广谱性培养基，N6用于单子叶植物的培养。豆科多用B5培养基。2、植物生长调节剂：必须进行筛选试验。总体原则-当诱导愈伤组织形成时，细胞分裂素和生长素相对平衡；诱导芽分化时，细胞分裂素水平应高于生长素，诱导根则要低。3、有机成分要根据培养类型考虑。如进行器官和组织培养，一般不加复杂有机成分，而进行细胞和原生质体培养则要加。 如何控制植物细胞分化 分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件 比例高时——产生芽,比例低时——产生根 四、外植体的选择与处理技术一是生长在自然环境下的植物；二是在温室控制环境条件下生长的植物；三是无菌环境下已经过离体培养的植物。 取材原则 （1）从健壮的植株上取材，不要取有伤口和病虫的材料 （2）晴天的中午或下午取材，不要在雨天、阴天或露水未干时取材。 （3）最好使用无菌苗。 外植体的选择 ①大小要适宜,不宜太小。外植体的组织块要达到2万个细胞（5-10mg）以上才容易成活； ②同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别； ③植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织； ④不同物种相同部位的外植体其分化能力可能大不一样。 第四节 愈伤组织的诱导与继代 一、愈伤组织的诱导 1. 外植体的选择 一般以幼嫩的组织或器官为宜。如根、茎、叶、果实、子房、花粉、花瓣等各种器官或组织。 种子是诱导愈伤组织的很好的起始材料，因为：①可将整粒种子放在加有生长物质的培养基上使其直接产生愈伤组织； ②在无激素的培养基上发芽，可产生无菌的根、茎、叶用作外植体；或直接剪下根原基及芽尖用作外植体。 2. 外植体材料的准备与消毒 外植体的消毒一般采用次氯酸钠(市面上售的一般为10-14%有效氯),使用时按1:10稀释,消毒时间以材料定,消毒后无菌水冲洗4-5次; 或用0.1%升汞消毒。 3. 愈伤组织诱导 愈伤组织的诱导采用的培养基的基本成分相似，但对于不同植物，不同物种都要对培养成分作相应改动，尤其是激素的成分和浓度是极为重要的因素。 二、愈伤组织的继代培养 愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的继续正常生长，更换一次培养基称一代继代培养(subculture) 。 为什么要进行继代培养？ 为什么要进行继代培养？ 经过诱导培养一段时间后，培养基里的养分耗尽 培养基已干燥 生长物已充满培养瓶 培养物需要扩繁 琼脂培养基褐化或发黑 需要让培养物在一种新的营养条件下生长 培养基由于植物材料的原因使pH降低，导致培养基液化 一般培养的愈伤组织需要每4~6周继代一次。 第一次转移的愈伤不宜过小，否则生长会受抑制。一旦愈伤建立起来，多数愈伤系需要每月继代一次。继代时一般情况下不需改变原培养基的成分，但很多物种需要将生长素降低些，尤其是使用2，4-D时。 三 、愈伤组织分化与植株再生 途径： 器官发生： 体细胞胚胎发生： 表现 ⑴单极分化：愈伤组织中的分生中心在刺激物质的影响下向着一极分化，形成有根无芽或者有芽无根的现象。 ⑵双极分化：愈伤组织中随着细胞分裂出现两个或两个以上分生中心，其中有的分化芽，有的分化根，根芽之间并无输导等组织沟通，在培养瓶内靠愈伤组织提供养料，这种以愈伤组织隔离着的芽和根的苗，常常不能移栽成活。 ⑶先芽后根：愈伤组织中产生多个分生中心，从中仅分化芽，待芽长到一定大小时，切下移入生根培养基中，在其基部即可分化出根; 有些植物在分化芽的培养基上同时在芽器官基部分化出根，形成完整的植株。大多数植物均属这类正常的分化途径，这类苗移栽较易成活。 ⑷先根后芽：有些植物外植体脱分化后在愈伤组织上先分化出根，而后在靠近愈伤组织的根部上再分化出芽，有的将根切下放入分化培养基，再于根上分化出芽器官，甚至在根端也能分化出芽。 四、试管苗移栽 试管苗不同于田间植株： 试管苗的角质层（蜡质层）发育很差，移栽易失水 根很弱，功能差 自然条件下，植物与真菌、细菌存在一种共生关系，试管苗缺乏这种关系。所以试管苗移栽入土时需要一个适应过程 试管苗移栽时应注意如下问题： 防止被病菌感染：琼脂要冲洗干净，最好用无菌土 为防止根受伤，过筛的细土 为了保证移栽时顺利成活，幼苗应在低盐培养基上生根，1/2MS或knop营养液 有时移栽后在低温处理一段时间以打破休眠 应该采取保持湿度的措施 五. 组织培养常见问题及对策1、污染及控制 污染：指在组培过程中培养瓶内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育