新世纪胚胎工程发展趋势及存在的问题.pptVIP

* LAMP--loop-mediated isothermal amplification 牛胚雄性特异DNA序列（S4） 对目标基因的6个区段设定4种引物，利用链置换反应在等温条件下使其发生反应。雄性变混浊。 不需要电泳，40分钟完成。 + - (Hiroki Hirayama et al.,2004) 胚胎取样 扩增 判定 * 鉴定结果 ♂ ♂ ♀ ♀ ♀ ♀ ♂ ♂ ♂ * 热点研究领域 动物配子/胚胎超低温冷冻保存技术 MOET育种技术 性别控制技术 转基因技术 核移植技术 胚胎干细胞技术 * 四、转基因技术 定义 转基因是指借助基因工程技术将体外重组结构基因导入(knock in)受精卵或早期胚胎，甚至由基因组中敲除(knock out)某基因片段，培育出转基因动物的技术。 * 转基因技术的意义 在基础生物学、医学研究 －转基因动物用于研究真核细胞的基因转录和表达调控以及个体发育的分子调控规律 －建立诊断和治疗人类疾病的动物模型 －转基因动物生产可用于人体器官移植的动物器官 动物生产中 －转入生长激素基因或关键代谢酶基因，可以提高动物产品的生产效率和质量 抗病育种中 －可以提高动物对疾病的抵抗力 生物反应器 生产药用蛋白或珍贵蛋白 * 转基因动物生产 1974年，美国学者Jaenisch首次应用显微注射法获得转基因小鼠。 1982年 Palmiter等 获超级小鼠(大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵)。 转基因家兔、绵羊和猪（Hammer等，1985）、牛（Bondioli 等，1988）和山羊（Ebert等，1991）等相继出世。 * 1997年10月，英国Roslin研究所成功克隆出3只携带有人凝血因子Ⅸ基因转染绵羊。 1999年2月，上海遗传研究所转基因试管牛“滔滔”诞生，其体内被检测到带有人的血清白蛋白基因。 2003年10月17日中国农业大学转有人岩藻糖转移酶基因的体细胞克隆牛“岩娃” 降生。 2004年6月日本克隆出转基因“荧光猪”。 2004年7月韩国大邱基督教大学医学院全球首次培育成功转基因(GFP)荧光鸡。 * 转基因动物生产方法 反转录病毒载体感染法(Jaenisch,1976) 显微注射法(Gordon,1980) 胚胎干细胞法 (Robertson等,1986) 精子载体法(Lavitrano等,1992) 体细胞核移植法 (Schnieke 等,1997) * 哺乳动物转基因 A.显微注射法 1.极体 2.受精卵原核 B.反转录病毒法 1.反转录病毒载体 2.早期胚胎 3.嵌合体胚胎 4.嵌合体 C.胚胎干细胞法 1.内细胞团 2.滋养层 3.分离内细胞团 4.内细胞团细胞 5.饲养层细胞 6.DNA转化 7.阳性细胞选择 8.阳性细胞注入囊胚腔 9.嵌合体 D.精子载体法 1.获能精子 2.携带外源DNA精子 3.原核期胚胎 4.阳性胚胎 E.细胞核移植法 1.目标基因 2.阳性细胞 3.细胞核移植 * * 转基因动物研究存在的问题 世界上转基因技术的历史较短，还没有一个国家将其产业化。 主要原因 目前为止基因导入很难做到定点整合、高效表达、正确调控和稳定遗传，不可避免会导致转基因在胚胎中随机整合； 整合的拷贝数与表达量不一致； 转基因动物的研究涉及生物学、畜牧学、医学的理论和技术问题，比较复杂。 * 热点研究领域 动物配子/胚胎超低温冷冻保存技术 MOET育种技术 性别控制技术 转基因技术 核移植技术 胚胎干细胞技术 * 五、核移植技术 定义 核移植也称克隆，包括胚胎克隆和体细胞克隆。 胚胎克隆定义 将胚胎细胞分离后，经显微操作把它植入去核的卵母细胞中，利用物理或化学的方法使之融合为一体，继而卵裂发育成胚胎，再经胚胎移植产下与核供细胞基因相同的动物。 * 体细胞克隆 定义 ★由体细胞中分离得到的细胞核移植到去核卵母细胞中,再利用物理或化学的方法使之融合为一体，继而卵裂发育成胚胎，再经胚胎移植产下与核供体细胞基因相同的动物。 ★应用动物克隆和转基因技术相结合，将目标基因导入家畜体细胞后, 再通过克隆技术生产转基因动物。 * * * 胚胎克隆技术在临床医学上应用 利用移植自体细胞克隆的胎儿的胰腺组织，可用于糖尿病患者的治疗。 利用自体细胞克隆出的胎儿的神经组织，可以治疗神经损伤、瘫痪以及治疗帕金森氏病等神经系统疾病。 移植自体细胞克隆出的胎儿的角膜，可以修复患者病变的角膜，使患者重见光明。 利用自体细胞克隆出的胚胎干细胞，甚至可以培育出所需要的人体各种器官、组织，用以替代、修复病变的器官、