知识点3菌种选育以及保藏.pptVIP

莽草酸 芳香族氨基酸 氯霉素 分叉中间体 反馈调节 芳香族氨基酸营养缺陷型可能增产氯霉素 (b) 筛选负变株的回复突变株 (c) 筛选去磷酸盐调节突变株 抑菌圈 (d) 筛选去碳源分解代谢调节突变株。 “葡萄糖效应” 葡萄糖的（毒性）结构类似物也可用于筛选去碳源分解代谢调节突变株 (e) 筛选氨基酸结构类似物抗性突变株。 α-氨基己二酸 赖氨酸 青霉素 分叉中间体 反馈调节 筛选赖氨酸结构类似物抗性突变株，可以促进青霉素合成 (f) 筛选二价金属离子抗性突变株 (g) 筛选前体或前体结构类似物抗性突变株 (h) 筛选自身所产的抗生素抗性突变株 ㈤ 突变基因的表现 菌种的发酵产量决定于菌种的遗传特性和菌种的培养条件 例如，诱变处理四环素产生菌得到的突变株 第四节 生产菌种的改良 一、常规的杂交育种 青霉菌的杂交过程实际上也是青霉菌准性生殖的过程 菌丝联结 异核体 杂合二倍体 亲本型分离子 重组型分离子 质配 核配 染色体交换 单倍化 二、原生质体融合 原生质体融合一般包括标记菌株的筛选、原生质体的制备、原生质体的融合、融合子的选择、实用性菌株的筛选等。 主要试剂：脱壁酶、聚乙二醇(PEG)和Ca2+ 原生质体融合过程简介如下 ： ⒈ 标记菌株的筛选 ⒉ 原生质体的制备 ⑴ 菌体的预处理 ⑵ 菌体的培养时间 ⑶ 酶浓度 ⑷ 酶解温度 ⑸ 酶解时间 ⑹ 渗透压稳定剂 ⒊ 原生质体的融合与再生 ⒋ 融合子的选择 ⒌ 灭活原生质体融合技术在育种中的应用 ⑴ 单一亲株灭活 ⑵ 双亲株或多亲株灭活 三、DNA重组技术 ㈠ DNA重组过程 重组DNA技术一般包括四步，即目标DNA片段的获得、与载体DNA分子的连接、重组DNA分子引入宿主细胞及从中选出含有所需重组DNA分子的宿主细胞。 作为发酵工业的工程菌在此四步之后还需加上外源基因的表达及稳定性的考虑。 ㈡ 分子育种技术 通过基因工程改造后的菌株称为工程菌 利用基因工程技术生产氨基酸 第五节 种子的扩大培养 一、种子扩大培养的任务 二、种子制备的过程 ⒈ 孢子制备 ⑴ 放线菌孢子的制备 菌种进入种子罐有两种方法： 孢子进罐法 摇瓶菌丝进罐法 搅拌种子罐 ⑵ 霉菌孢子的制备 ⒉ 种子制备 ⑴ 摇瓶种子制备 ⑵ 种子罐种子制备 比较：种子制备的目的和发酵的目的 种子罐的级数主要决定于菌种的性质和菌体生长速度及发酵设备的合理应用。 种子罐级数减少，有利于生产过程的简化及发酵过程的控制，可以减少因种子生长异常而造成发酵的波动。 酵母菌的三级培养过程 三、种子培养 ⒈ 表面培养法 ⒉ 固体培养法 ⒊ 液体深层培养 四、种子质量的控制 ㈠ 影响孢子质量的因素及其控制 ⒈ 培养基 ⒉ 培养温度和湿度 例如：龟裂链霉菌斜面 ⒊ 培养时间和冷藏时间 ⑴ 孢子的培养时间 ⑵ 孢子的冷藏时间 ⒋ 接种量 分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化 5L罐延迟期（4h） 5L罐对数期（32h） 5L罐稳定期（48h） 5L罐衰亡期（68h） 摇瓶衰亡期（72h） ⒌ 种子质量标准 ⑴ 细胞或菌体 ⑵ 生化指标 ⑶ 产物生成量 ⑷ 酶活力 ⒍ 种子异常的分析 ⑴ 菌种生长发育缓慢或过快 ⑵ 菌丝结团 ⑶ 菌丝粘壁 放线菌 菌丝团 霉菌菌丝 思 考 题 ⒈ 微生物有哪些特点?试举例说明微生物的工业应用。 ⒉ 工业生产中使用的微生物菌种为什么会发生衰退？菌种衰退表现在哪些方面？防止菌种衰退的措施有哪些？ 思 考 题 ⒊ 简要说明诱变育种的步骤。诱变育种应注意哪些问题？ ⒋ 试比较诱变育种技术、原生质体融合技术、DNA重组技术三种育种方法的优缺点。 ⒌ 影响种子质量的因素有哪些?如何控制种子质量？ 诱变过程 L-亮氨酸产量/g?L-1 发酵方式 黄色短杆菌 分批发酵 （恒温28℃） 补料分批发酵 （恒温28℃） 补料分批发酵 （变温控制） TQ9806(Rifr300μg/mL) 18.5 21.3 22.7 ↓自发突变 TK0301(Rifr400μg/mL) 21.8 23.1 24.3 ↓DES+LiCl复合诱变 TK0302(Rifr600μg/mL) 23.5 25.9 26.6 ↓UV+LiCl复合诱变 TK0303(Rifr800μg/mL) 25.2 27.7 28.3 ↓ UV与光复活交替处理 +LiCl复合诱变 TK0304(Rifr1000μg/mL) 26.4 28.0 26.9 目的突变菌株TK0303的诱变图谱 导致微生物同步生长的选择法 三、诱变育种方案设计 ㈠ 突变的诱发 诱变剂所造成的DNA分子的某一位置的结构改变称为前突变。 ⒈ 诱变剂接触DNA分子 ⒉ DNA损伤的修复 光复活作用 切补修复 重组修复 SOS修复系