遗传重组-转座-敲除(2).pptVIP

第九章 DNA的重组与转座 重组的定义 遗传重组的类型 同源重组的分子机制 重组和酶 位点特异性重组 转座 转座的机制 遗传重组的应用 6.0 重组 DNA分子的断裂和重新连接导致遗传信息的重新组合，称为重组（recombination）。重组的产物称为重组DNA（recombinant DNA），所有的DNA都是重组DNA。由于重组，一个DNA分子的遗传信息可以和另一个DNA分子的遗传信息结合在一起，也可以改变一条DNA分子上遗传信息的排列方式。DNA重组广泛存在于各类生物中，说明重组对物种生存具有重要意义。通过重组实现基因的重新组合使物种能够更快地适应环境，加快进化的过程。此外，DNA重组还参与许多重要的生物学过程，比如重组在DNA损伤修复和突变中发挥重要作用。 6.1 遗传重组的类型 根据对DNA序列和所需蛋白因子的要求，可有三种类型的重组。其共同点是这些过程都涉及双链DNA之间的物质交换，但其发生的情况有所不同。 遗传重组的三种类型 它的发生是依赖大范围的DNA同源序列的联会。在重组过程中，两个染色体或DNA分子交换对等的部分。 ⒈需要重组的蛋白质参与，eg.大肠杆菌中的RecA蛋白、RecBCD蛋白； ⒉蛋白质因子对DNA碱基序列的特异性要求不高；（存在重组热点和序列长度的影响） ⒊真核生物染色质的状态影响重组的频率。 (3)异常重组 完全不依赖于序列间的同源性而使一段DNA序列插入另一段中，但在形成重组分子时往往是依赖于DNA复制而完成重组过程。eg.转座作用，需要转座酶和对转座区域DNA的复制。 6.2 同源重组的分子机制 同源重组（homologous recombination）发生在两个同源DNA分子之间。真核细胞减数分裂过程中，同源染色体彼此配对，同源染色体DNA片段发生交叉与互换。 Darlington D. C.于1936年提出：减数分裂同源染色体联会时，非姊妹染色单体由于缠绕而产生张力，两个染色单体在同一位置断裂、重接，以消除张力，从而产生重组。 Holliday intermediates Holliday模型 Holliday模型能够较好解释同源重组现象，但也存在问题。该模型认为进行重组的两个DNA分子在开始时需要在对应链相同位置上发生断裂。DNA分子单链断裂是经常发生的事，但很难设想两个分子何以能在同一位置发生断裂。 6.2.3 Meselson-Radding模型 Holliday模型中为对称的杂合双链，而实际情况有不均等分离现象。 1975年，Matthew Meselson 和 Charles Radding对Holliday 模型进行了修改。 Holliday模型要求在两个并排对齐的同源DNA分子的对应位点形成单链切口，从而产生游离的单链末端。然而，在Meselson-Radding遗传重组模型中，仅在一个双螺旋上产生单链切口。利用切口处3’-OH合成的新链把原有的链逐步置换出来，使之成为以5’－P为末端的单链区。随后游离的DNA单链侵入另一条DNA双螺旋中，取代它的同源单链并与其互补链配对形成异源双链区，被置换的单链形成D－环（D-loop）。 但是更多的事实表明，重组是由双链断裂所启动。现在认为，同源重组是减数分裂的原因，而不是减数分裂的结果。DNA分子双链断裂才能与同源分子发生链的交换，藉以将同源染色体分配到子代细胞中去。因此，双链断裂启动重组，也启动了减数分裂。 6.2.4 双链断裂重组模型（model of double-strand breaks recombination） 一条染色体的两条链都发生了断裂，断裂是由内切酶水解磷酸二酯键的结果。 DNA断裂之后由核酸外切酶扩大缺口, 接着是断裂链的游离3’端插入到具有完整双链的同源染色体中，形成D-环结构。 在DNA聚合酶的作用下，断裂两条链分别以完整链为模板开始合成, 最后再通过断裂重接过程完成重组。 6.3 重组和酶 在原核生物同源重组中存在8个碱基组成的Chi位点（重组热点） —— 5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5 在E.coli中每隔约5~10 kb有一个拷贝 Rec和Ruv蛋白参与重组。 RecA蛋白 RecA具有单链DNA和双链DNA的结合活性，能启动DNA单链和与之互补的双链分子进行碱基配对——催化单链取代。 RecA能促进SOS反应中的蛋白酶活性。 单链取代 (single-strand uptake) 其中一个DNA 分子要有单链区； 其中一个DNA 分子要有游离的3末端； 单链区和3‘末端可和另一DNA分子互补。 RecBCD复合体具有核酸酶，解旋酶和ATPase