002 遗传物质的分子基础2.pptxVIP

第三节 DNA的复制;1 复制的一般特点;DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 ;瓦特森(Watson J. D.)等提出的DNA半保留复制方式。　　其方法为：　　①．一端沿氢键逐渐断开；　　②．以单链为模板，碱基互补；　　③．氢键结合，聚合酶等连接；　　④．形成新的互补链；　　⑤．形成了两个新DNA分子。DNA的这种复制方式对保持生物遗传的稳定??是非常重要的。 ;验证半保留复制的实验;1. Meselson-Stahl 的实验;DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点(origin) 。 在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。 复制子：在同一个复制起点控制下的一段DNA序列。 ;习惯上把两个相邻DNA复制起始点之间的距离（或DNA片段）定为一个复制子(replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能单位。 DNA复制时，局部双螺旋解开形成两条单链，这种叉状结构称为复制叉。;;复制起始点、复制子与复制叉（动画演示）;原核生物染色体上的复制叉;真核生物染色体上的多个复制位点;DNA复制时，以复制起始点(origin)为中心，向两个方向进行解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制(bidirectional replication)。 但在低等生物中，也可进行单向复制（如滚环复制）。;;Section 2 Factors for DNA Replication;以四种脱氧核糖核酸(deoxynucleotide triphosphate)为底物，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP。;DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为 模板。亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板 进行复制。 ;解螺旋酶(helicase) ，又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶。 每解开一对碱基，需要 消耗2分子ATP。;单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），又称螺旋反稳蛋白(HDP)，是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。;SSB的生理作用;五、DNA拓扑异构酶;;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶的作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;引物酶(primerase)本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 引物酶需组装成引发体才能催化RNA引物的合成。;在E. coli中，含有解螺旋酶(DnaB蛋白) 、引物酶(DnaG蛋白)和DNA复制起始区域的复合结构被称为引发体(primosome) 。 ;;;七、DNA聚合酶;;在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。; 原核生物中的三种DNA聚合酶?;在真核生物中，目前发现的DNA聚合酶有五种:;DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。;;DNA连接酶催化的条件是： ① 需一端DNA片段具有3‘-OH，而另一段DNA片段具 有5-Pi基； ② 未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链 是完整的； ③ 需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真 核生物中由ATP供能。; DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 是基因工程的重要工具酶之一。;3 DNA复制过程;DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。 1．解旋解链，形成复制叉： 由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。 单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。;2．引发体组装和引物合成： 由解螺旋酶(DnaB蛋白) 、引物酶(DnaG蛋白)和DNA复制起始区域形成引发体； 在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3-OH）。 ;二、复制的延伸 ;;前导链的合成过程;;DNA聚合酶Ⅲ催化前导链和后随链同时合成;DNA复制过程简图;三、复制的终止 ;在DNA连接酶的催化下