PCR技术在临床上的应用.pdf

Bringing Technology to Life PCR 技术在临床上的应用 随着分子医学及分子生物学的发展，在生物医学实验室诊断领域，发生了飞跃的变化， 至此，自第一代的细胞形态学检验技术之后，发展到 50 年代生化指标作临床诊断疾病的依 据，到 60 年代抗原抗体酶标记技术的迅猛发展形成了第三代免疫学诊断技术，到 80 年代 初期基因重组技术的应用形成了第四代基因诊断技术。 在现代医学对疾病的诊断中，各种诊断技术密切配合，有机的结合在一起，构成了现 代生物医学领域中最活跃的学科——临床实验诊断学的有机整体，为人类的健康发挥其重 要作用。 从病原微生物检测角度看，PCR 检验的应用以长程培养或无法分离培养者为优先考虑， 如 TB、衣原体、HPV 、HBV 、HCV 和军团菌。从遗传学考虑，则以有明确基因突变而引 起疾病者适于此项检测。从肿瘤诊疗考虑可以研究发病机制及治疗中耐药问题。下面主要 从传染病、性病、优生优育、遗传病、肿瘤五个方面举例 PCR 在临床检验中的应用。 一、PCR 技术在传染性疾病方面的应用 乙型肝炎病毒 (HBV) 我国是乙肝高发区，乙肝病人占世界乙肝病人总数的 50%，乙型肝炎对我国危害很大； 乙型肝炎的病因学诊断和治疗效果的判定一直是医生和病人所关心的问题。 （1）病情判断和疗效跟踪 PCR 能判定病人血液中有否乙肝病毒及病毒含量，从而得知 病毒在肝脏的复制情况；定量PCR可测出病人血液中病毒的拷贝数，从而了解病毒在 体内复制的动态情况，判断病情，观察药物疗效，适时调整治疗方案；还可以决定乙 肝治疗的终点。 （2 ）乙肝病毒变异株的检测。 （3 ）肝炎病毒复制的直接实验室证据，可判断病毒携带者有否传染性。 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒是一种单链正股RNA病毒，归类于黄病毒科，主要通过血液传播。此病 毒呈全球性分布，无明确地理界限。全球约有1%的人感染此病，约50% 以上慢性肝炎是由 HCV感染引起的。我国由于对献血员筛选方法不够灵敏，急性病毒性肝炎中，输血后乙肝 发病率占2/3,其余1/3为丙型肝炎，其中20—30%病人发展为肝硬化。因此，为保障血液安 全，维护受血者的健康利益，寻找一种快速、简便、准确的诊断方法，对患者提供早期诊 断，是时势所趋。 Bringing Technology to Life 荧光 PCR 检测 HCV RNA 血清中的 HCV RNA 是病毒复制和进程的确切标志。所以，检测血清 HCV-RNA 已成为 诊断 HCV 病毒血症的“金标准”。HCV 感染者血清病毒滴度通常很低，常规分子杂交技术 难以检出 HCV-RNA 。近年发展的RT-PCR,巢式 PCR 技术将 HCV-RNA 的特异性和灵敏度 大大提高，而荧光 PCR 的出现又将此技术推向了另一台阶。 通过荧光 PCR 的方法可以直接检测 HCV-RNA,大大提高 HCV 感染的检测准确性，有利 于疾病的早期诊断，可将窗口期缩短 50 多天，对窗口期感染的筛选和提高输血安全也非常 有意义。此外，在抗病毒药物治疗中，HCV RNA 是对其疗效评价的指标之一，其检测 HCV RNA 的滴度和基因型可对用药和预后提供参考。在治疗过程中，HCV RNA 的动态监测同 时还可为临床上的用药剂量、时间提供依据。 结核杆菌 近20年来，曾经控制在很低水平的结核病，在世界范围内有死灰复燃的趋势。我国卫 生部组织的第四次全国结核病流行病学抽样调查显示：目前我国有4亿人感染过结核杆菌， 现有传染性结核病人200万人，这使我国成为全球22个结核病高负担的国家之一，结核病人 数位居世界第二，仅次于印度。结核病的致病菌是结核杆菌，主要通过呼吸道传播，亦可 以从消化道进入人体，其对外界的抵抗力较强，在阴湿的地方可以存活5个月以上，带菌的 痰液是结核杆菌的主要传染源。结核病尚有一个不同于其他传染病的特点：大多数人被感 染上结核杆菌后并不马上发病，多数可以终生不