II型糖尿病患者红细胞膜钠钾泵活性研究.ppt

II型糖尿病患者红细胞膜钠钾泵活性研究 生物医药工程系 2009级生物技术专业 第二小组 负责人：高晓航 小组成员：曹林、庞圆涛、苏志远、赵鹏飞 目 录 一、II型糖尿病概述 二、钠钾泵概述 三、临床资料 四、结果 五、讨论 六、相关资料 一、 Ⅱ型糖尿病概述 　　Ⅱ型糖尿病也叫成人发病型糖尿病，多在35~40岁之后发病，占糖尿病患者90%以上。 Ⅱ型糖尿病病友体内产生胰岛素的能力并非完全丧失，有的患者体内胰岛素甚至产生过多，但胰岛素的作用效果却大打折扣，因此患者体内的胰岛素可能处于一种相对缺乏的状态。 二、钠钾泵概述 　　　钠钾泵（sodium potassium pump）又称钠钾帮浦，它会使细胞外的NA+浓度高于细胞内，当NA+顺着浓度差进入细胞时，会经由本体蛋白质的运载体将不易通过细胞膜的物质以共同运输的方式带入细胞。钠钾泵（也称钠钾转运体），为蛋白质分子，进行钠离子和钾离子之间的交换。每当三个钠离子被转运出细胞，就有两个钾离子被转运到细胞内部。保持膜内高钾膜外高钠的不均匀离子分布 。 细胞内高钾是许多代谢反应进行的必需条件；防止细胞水肿；势能贮备。 组成和作用方式 组成 　　 Na—K 泵由α、β两亚基组成。α亚基为分子量约 120KD 的跨膜蛋白，既有Na、K 结合位点，又具 ATP 酶活性，因此 Na—K 泵又称为 Na—K—ATP 酶。β亚基为小亚基，是分子量约 50KD 的糖蛋白。 　 　一般认为 Na—K 泵首先在膜内侧与细胞内的 Na 结合，ATP 酶活性被激活后，由 ATP 水解释放的能量使“泵”本身构象改变，将 Na 输出细胞；与此同时， “泵”与细胞膜外侧的 K 结合，发生去磷酸化后构象再次改变，将 K 输入细胞内。研究表明，每消耗 1 个 ATP 分子，可使细胞内减少 3 个 Na 并增加 2 个 K。 　　 细胞膜钠钾泵作用首先是由Hodkin和Keynes(1955)所发现.1957年Skou发现了Na+-K+ ATP酶并证明其与钠钾泵的作用有关. 作用方式 　　钠钾泵的作用方式可因不同生理条件而异,在红细胞膜中可能有以下几种方式: 　　1.正常的作用方式——利用ATP的水解与Na+-K+的跨膜转运相偶联. 　　2.泵的反方向作用——利用Na+-K+的跨膜转运来推动ATP的合成. 　　3.Na+ - Na+交换反应可能与ATP和ADP交换反应相偶联. 　　4.K+ - K+交换反应与Pi和H2(18)O的交换反应相偶联. 　　5.依赖ATP水解,解偶联使Na+排出. 钠钾泵与疾病 　　 经科学研究，发现Na+-K+泵在人体的正常代谢中具有非常重要的作用，与一些疾病的发生也有着密切的关系。如肝水肿，白内障，囊纤维化，癫痫 ，偏头痛 ，高血压等。另外，最近的研究表明, Na+-K+泵还与屡减仍肥有着千丝万缕的关系。 　 在这里，仅就ＩＩ型糖尿病与Na+-K+泵的关系做一部分研究。 三、临床资料 １.病例选择 　　　未治疗的ＩＩ型糖尿病患者３３例，其中男１５例，女１８例。年龄３５～５５岁。按空腹血糖值分为３组： 　　（１）轻度：空腹血糖６.６７～７.７８ｍｍｏｌ／Ｌ。 　　（２）中度：空腹血糖７.７８～１１.１ｍｍｏｌ／Ｌ。 　　（３）严重：空腹血糖＞ １１.１ｍｍｏｌ／Ｌ。 　　　空腹及餐后血搪都正常的正常对照１７例（男７例, 女１０例）。各组间年龄、体重指数（ＢＭＩ）无明显差异。 ２.方法 　 　　（１）口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ）所有研究对象均隔夜空腹,次晨８点口服７５ｇ葡萄糖,按空腹、餐后３０分钟、６０分钟、１２０分钟四点取血样分别作血糖、胰岛素测定。并计算血糖曲线下面积（ＡＵＣ）,胰岛素曲线下面积（ＡＵＣ）。 　　（２）钠钾泵、钙泵活性测定 钠钾泵活性测定 红细胞膜制备： 　　　取静脉血２ｍｌ加ＥＤＴＡ抗凝,采血后立即用３００ｇ离心２分钟,红细胞用５０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ一ＨＣＩ一ＥＤＴＡ生理盐水（ｐＨ７．４）等渗液洗涤３次,然后按１：２０的比例向洗净的红细胞中加人预冷（４℃）的１０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ一ＨＣＩ缓冲液（ｐＨ７．４）,轻轻摇动几下后放置于冰箱中２０分钟,使红细胞充分溶血,然后以６０００ｇ离心２０分钟去掉上清液,同样条件洗３次,即得红细胞膜。以上操作均在４℃条件下完成。 膜蛋白测定（Ｌｏｗｒｙ改良法）： 　　　７２１分光光度仪在波长６６０ｎｍ处测定光吸收,用牛血清白蛋白作标准。 离子泵活性测定（Ｍｓｕｓｚｂｅｋ改良法）： 　　　　钠钾泵反应体系：含膜蛋白５０～６０ｍｇ／Ｌ,１００ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ, １０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ