山羊角膜缘干细胞荧光蛋白（Venus）细胞株的建立及.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, December 25; 26(12): 1636−1644 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2010 CJB, All rights reserved. 干细胞专栏 山羊角膜缘干细胞荧光蛋白 (Venus) 细胞株的建立及 角膜上皮植片构建 1 1 1 1 1 2 1 1 1 殷吉庆 ，刘文强 ，刘超 ，赵贵民 ，张翊华 ，刘维帅 ，华进联 ，窦忠英 ，雷安民 1 西北农林科技大学动物医学院 陕西省干细胞工程技术研究中心，杨凌 712100 2 杨凌示范区医院病理科，杨凌 712100 摘 要: 角膜缘干细胞是角膜上皮更新与修复的来源，角膜上皮受损严重常会导致角膜盲。尽管近几年通过角膜缘干 细胞移植术 (LSCT) 治愈角膜上皮受损的临床应用已被推广，但是对于角膜缘干细胞移植受损机体后的修复机理并不 明确。为了实现角膜缘干细胞移植后的活体追踪，使用G418 筛选标记有Venus 荧光蛋白的角膜缘干细胞株 (GLSC-V) ， 并以其为种子细胞接种于去上皮羊膜上，体外培养21 d 构建成荧光角膜上皮植片。荧光倒置显微镜下观察GLSC-V 的 细胞质和细胞核均有绿色荧光表达，在体外培养荧光至少持续3 个月。免疫荧光检测GLSC-V 细胞P63 、Integrinβ1 均 呈阳性表达，对GLSC-V 细胞及未转染的GLSCs 进行半定量RT-PCR 检测显示，两组细胞皆未表达终末分化角膜上皮 细胞基因k3 、k12 ，GLSC-V 中p63 及pcna 较未转染组细胞略上调，venus 强表达。经HE 染色观察构建的人工角膜组 织由 5~6 层上皮细胞组成，组织中上表皮细胞个数少、体积大且呈扁平状；基底部细胞密集、体积小且成立方状。经 免疫荧光检测仅组织基底部最基层细胞表达P63 ，上表皮细胞不表达。该人工角膜与正常角膜上皮组织结构特性相似， 可用于移植，为研究角膜缘干细胞修复严重受损角膜上皮机理奠定基础。 关键词: 角膜缘干细胞，Venus 荧光蛋白，去上皮羊膜，角膜缘干细胞移植术，荧光角膜上皮植片 Establishment of goat limbal stem cell strain expressing Venus fluorescent protein and construction of limbal epithelial sheets 1 1 1 1 1 2 1 Jiqing Yin , Wenqiang Liu , Chao Liu , Guimin Zhao , Yihua Zhang , Weishuai Liu , Jinlian Hua , 1 1 Zhongying Dou , and Anmin Lei 1 Shaanxi Stem Cell Engineering and Technology Research Center, College of Veterinary Medicine, Northwest A F University, Yangling 712100, China 2 Department of Pathology, YangLing Demonstration Areas Hospital, Yangling 712100, China Abstract: The integrity and transparency of cornea plays a key role in vision. Limbal Stem Cells (LSCs) ar