上海科学技术出版社版高中生命科学第一册：实验2.2 溶液中蛋白质含量的测定（选做）.pptVIP

溶液中蛋白质含量的测定 一、实验目的： 1、学习利用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量的原理及方法； 2、掌握分光光度计的使用方法； 3、掌握标准曲线的绘制。 二、实验原理 1 分光光度技术 (1)基本原理： 利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术，使用的仪器称为分光光度计. 红外光:波长范围2.5100 nm ,主要用于有机化合物 结构鉴定。 紫外长:范围200400 nm（近紫外区），可用于结构 鉴定和定量分析。 可见光:波长范围400750 nm ，主要用于溶液等的定 量分析。 (2) 光吸收定律： 朗伯——比尔（Lambert－beer）光吸收定律： A＝－lgT＝εbc （1）A—吸光度 “OD”。 （2）T—透光度 （3）ε—摩尔吸光系数（是溶液的特征常数）。 （4）b——样品光程（cm），通常使用1.0cm 的吸收池， b=1cm。 （5）C­——样品浓度（mol/L