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北京畜牧兽医研究所博士后科研成果简介 一、高效转基因动物制备方法研究 转基因动物制备效率一直是影响转基因技术发展的重要因素。在 导师李奎教师的指导下，鞠辉明带领的科研团队在转基因猪制备方法 及理论方面开展了深入研究。首先，在基因载体构建方面进行了多个 改进研究，将多个基因表达盒整合到一个表达载体上，通过一次转基 因操作，实现多个性状基因的共表达，利用该技术成功获得了同时表 达大肠杆菌植酸酶appA2 基因及人MxA 基因的转双基因小鼠及猪，转 基因动物具有较好的低磷排放及较高的抗病性优势。其次，在基因表 达调控方法开展了相应的研究，通过对传统的四环素诱导系统进行了 技术改进，将诱导系统的基因调控盒及表达盒整合到一个载体上，并 进行了启动子优化，在转基因细胞、转基因小鼠及猪中证明，该改进 方法在不影响调控效率的前提下，实现了外源基因的可控表达，该技 术成功用于整合性可控表达MSTN shRNA、GH shRNA 及GH 基因转基因 小鼠及转基因猪的制备，大大提高转基因效率。另外，本研究团队还 开展了猪 “友好基因座”Rosa26 基因座及内源精原干细胞介导转基 因方面开展了研究，利用生物信息学方法，通过基因分析及比对，克 隆并检测猪 “友好”基因座rosa26；设计出高效的锌指核酸酶ZFNs， 借助于锌指核酸酶将肝脏特异表达 Sfat-1 基因表达盒定点整合到猪 rosa26 基因座，利用体细胞克隆的方法制备出Sfat-1 转基因猪；利 用内源 A 型精元干细胞转染外源基因，成功制备了表达 GFP 基因、 appA2基因及人MxA 双基因转基因小鼠。该项目研究成果发表在Food, Agriculture and Environment 、 Journal of Integrative Agriculture、Agricultural Sciences in China、畜牧兽医学报等 国内外学术期刊；申报国际专利1 项，于2014 年获得授权。申请国 内专利2 项目，均已获得授权。 项目成果： 申请相关专利： “A METHOD FOR PREPARING A TRANSGENIC ANIMAL OF SIMULTANEOUS MULTIPLE-GENE EXPRESSION” （国际申请号：PCT/CN2010/000943， 发明设计人：Li Kui, Ju Huiming, Fan Junhua, Bai Lijing, Mu Yulian, Yang Shulin, Tang Zhonglin, Cui Wentao ）于2014 年获 授权 《一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法》(发明设计人： 李奎;鞠辉明;樊俊华;白立景;牟玉莲;杨述林;唐中林;崔文涛 ，授权 专利号： 201010034318) 《一种表达双基因的真核表达载体》(发明设计人：李奎;鞠辉明; 白立景。授权专利号：200910089428) 发表相关论文： Huiming Ju, Yuefei Yang, Lijing Bai, Lei Huang, Xin Jiang, Yulian Mu, Kui Li. Identification and targeting of the pig Rosa26 locus, Food, Agriculture and Environment, 2015, 13(2): 149-155 Lijing Bai, Huiming Ju, Yulian Mu, LI Kui. The Establishment of Double-Transgenic Mice that Co-Express the appA and MxA Genes Mediated by Type A Spermatogonia In vivo. Journal of Integrative Agriculture，2014, 13(12): 2741 –2749 (共同第一 作者) Huiming Ju, Lijing Bai, Hong-yan Ren, Yulian Mu, Shu-lin Yang, Kui Li. Production of Transgenic Mice by Type-A Spermatogonia Mediated Gene Transfer，Agricultural Sciences in China ， 2011, 10(3): 101-105 鞠辉明,白立景,牟玉