北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究.pdf

遗传学报，13(2):136-143}1986 Acta Genetica Sinica 北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究” 11.薄层等电聚焦电泳鉴定北京鸭LDH同工酶 李士鹏2) 吴鹤龄 北（京大学生物学系） 对薄层等电聚焦电泳所分离的北京鸭乳酸脱氢酶 (LDH）同工酶 11条电泳区带，经热稳 定性实验和低浓度尿素抑制实验鉴定发现，LDH1是由5条亚带组成的，LDH2和 LDH3 也各由两条亚带组成。对这种 LDH 同工酶亚带的产生原因，进行了初步探讨，认为可能是蛋 白质亚基在翻译后受到某种化学修饰所造成的。 在本课题研究的第 9I‘;部分中3)，我们已报道了北京鸭 LDH 同工酶有11条电泳区 带。这种多于标准的5种 LDH 同工酶区带的现象，引起了一个各区带归属的鉴定问 题。我们经过热稳定性实验和低浓度尿素抑制实验鉴定，发现北京鸭的LDH1及LDH 2和 LDH3都具有不均一性的亚带。 同时对 LDH1的5条亚带的产生原因作了初 步探讨，认为可能是 LDHB亚基在翻译后，受到某种化学修饰产生 B亚基而后再组合 的结果。 材 料 和 方 法 一（）实验动物 北京鸭取自北京西苑鸭场。我们主要用初生北京鸭肝脏进行鉴定实验分析，这是因 为初生鸭肝含有 LDH 同工酶最为丰富，并且11条电泳区带分配得比较均匀。 二（）样品制备 取0.2ml组织匀浆样品，分别于600C.67℃和74℃水浴中处理。处理时间为2至8 分钟不等，为热处理的样品。 取0.2ml浓缩1倍的组织匀浆样品，以一定克分子浓度的尿素溶液0.2ml等量稀释 为1至5m 尿素处理的样品。 取淀粉凝胶电泳制备的 LDH 同工酶 d,d区带部分 见（后面介绍的制备的电泳方 法)}P}少许 约（0.5MI)0.01M 磷酸缓冲液 和H7.叼 抽提，离心，除去凝胶沉淀后加人等 量的2M NaCl溶液，放置冰盒中结冻，再置室温融化。最后用O.Olm 磷酸缓冲液 p（H 本文于198，年1月6日收到。 1)李汝祺教授系本文作者之一的研究生导师，对李先生的教诲，作者深表铭记。生物物理所雷克健副研究员，王 锦兰工程师在薄层等电聚焦电泳理论和技术上曾予指教，特此致谢． 2）现在中国科学院发育生物学研究所。 3）发表于 遗《传学报》13卷第1期。 2期 李土鹏等：北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究 II. 13: 7.勺透析除去 NaCl，即为 1M NaCI冻融处理的样品。 三（）电泳方法 薄层聚丙烯酸胺凝胶等电聚焦电泳方法同本课题研究的第 C1‘“部分所介绍的相一 致。 制备的淀粉凝胶电泳系不连续的pH6.OTris-citricacid系统U210凝胶厚达8mm，电 泳后分割为两片。其一用于染色以确定所需要的d,d区带的位置；另一片切下该区带 部分。 实 验 结 果 图1是经低浓度尿素 (1-5M）处理后的初生鸭肝的 LDH 同工酶酶谱。从图中可 见，1M,2M尿素处理后，没有引起酶谱的任何改变；而在3M尿素处理的样品中，负极 端的e-7的6条区带被抑制；正极端 a,b,c,d和 d的5条区带保留下来；4M,,5M尿 素处理后，所有的11条区带全被抑制。我们又进一步分析了2-3M 尿素浓度的处理情 况，发现从2.2M 尿素浓度开始就产生了上述3M 尿素的抑制现象。 图I 低浓度尿素处理后的初生鸭肝 LDH 同工酶薄层等电聚焦酶谱 1M,2M 尿素处理同对照，无抑制现象发生。 3M 尿素处理把 LDH 同工酶所有 11条区带分成 两部分，如箭头所示。上面一部分包括 a,b,c,d(d）区带为LDH址4M,5M 尿素处理所有 区带都被抑制。 Fig.1LDH isozymepatternsofthehatchingducklivertreated