微生物的生长.pdf

第七章 微生物的生长 [教学目标]本章主要对微生物的生长与繁殖规律；微生物生长的测定；纯培养的分离；理化因素 对微生物生长的影响等。 [教学的重点和难点]微生物的群体生长规律；纯培养的分离与测定；理化因素对微生物生长的影 响。 [教学方法和手段] 主要以讲授为主，应用多媒体课件进行形象生动的课堂教学。 [教学内容] § 微生物的分离和纯培养1 在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有 一种微生物的培养物称为纯培养物(pureculture)。由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用 和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微 生物学研究的基础。 一、 无菌技术 微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。因此，在微生物的研究及应用中，不仅 需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生 物纯培养物的 “纯洁”，防止其他微生物的混入。在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生 物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。 1、 微生物培养的常用器具及其灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿(culturedish，petridish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须 先行灭菌，使容器中不合任何生物。培养微生物的营养物质[称为培养基(culturemedium)]可以加到器 皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以 杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都 需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过， 而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微 生物的污染而设计的。 2、 接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器 进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他 微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无 菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时 间内用紫外灯或化学药剂灭菌。有的无菌室通无菌空气维持无菌状态。 用以挑取和转接微生物材料的接种环及接种针，一般采用易于迅速加热和冷却的镍铬合金等金属 制备，使用时用火焰灼烧灭菌。而转移液体培养物可采用无菌吸管或移液枪。 二、 用固体培养基分离纯培养 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物 进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌，以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形 成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板(cultureplate)的简 称，它是指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。这方法包括将单 个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基， 每个孤立的话微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固 体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Koch建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行， 100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 1、 稀释倒平板法(pourplatemethod) 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1000、1:10000…)，然后分别 取 不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾人灭过菌的培养皿中， 待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在乎板 表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后 挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 2、