心理应激性失眠对大鼠脑组织P物质表达的影响.pptxVIP

心理应激性失眠对大鼠海马P物质表达的影响;一、目的和要求;; 心理应激性失眠发病率正逐年升高。 95%的成人曾发生过失眠，4.4－11.7%的人群患有慢性失眠，其中80%是心理应激性失眠。 1957年Dement和Kleitmen创建了多导睡眠图（PSG），同时记录脑电图，肌电图，眼动图，心电图等多种生物电活动，综合分析睡眠时相。 ; 1968年Rechtschaffen和Kales等根据EEG、EMG、EOG等生物电变化指标，制定了睡眠分期标准，此方法得到国际认可，沿用至今。 失眠与情绪障碍心理应激有一定的内在联系。 应激可以引起与情感相关脑区P物质（SP）的释放，SP与睡眠有复杂的联系。;; ;;;手术;; 大鼠 ;睡眠描记及分析;取材;(1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 (2) 30%H2O21份+蒸馏水10份混合，室温10分钟以灭活内源性酶。 (3) PBS洗5分钟×3次。 (4) 抗原修复 对于大部分指标，可以直接进入下一步；对于难以显示的抗原，可以将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH 6.0）电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次，冷却后PBS洗5分钟×3次。 (5)滴加正常山羊血清封闭液，室温30分钟。甩去多余液体，不洗。 (6)滴加适当稀释的一抗（兔抗小鼠），37 ℃ 1-2小时或4 ℃过夜。;(7) PBS洗5分钟×3次。 (8) 滴加生物素化二抗（羊抗兔），37 ℃1小时。 (9) PBS洗5分钟×3次。 (10)滴加试剂SABC，37 ℃1小时。 (11)PBS洗5分钟×3次。 (12)DAB显色：使用DAB显色试剂盒。取1毫升蒸馏水，加试剂盒A，B， C试剂各1滴，混匀后滴加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-10分钟之间。也可以自配显影剂显色。蒸馏水洗涤。 (13)苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。 (14)结果 阳性细胞呈棕黄色或棕褐色。;三、实验结果; 表1 两组大鼠wake比例（％） Tab1 percentage of wakefulness in each group（％）;组别;图A 对照组×400 图B 模型组×400 FigA normal group×400 FigB model group×400 ;简述心理应激性失眠导致SP表达变化的可能机制及意义。 免疫组化染色过程中注意应什么?;Thank you very much!