分子生物学实验基本原理.ppt

4. PCR反应体系中各种成分的作用、用量 ⑴ KCl：促进引物退火，使用量为50 mmol/L，过低，不起作用；过高则抑制Taq DNA聚合酶活性。 ⑵ MgCl2：Mg2+能影响反应的特异性和扩增速度、产量。比较合适的用量为1.5 mmol/L～2.0mmol/L。 ⑶ 明胶和BSA 对Taq DNA聚合酶有一定保护作用（尤其高温变性时）。 ⑷ Tris·HCl：调节PH值并起缓冲作用，Taq DNA聚合酶发挥作用需要一个偏碱环境（pH8.4），Tris·HCl就起到这样的一个作用。 ⑸ 底物（脱氧核糖核苷三磷酸，dNTPs）：合成新链DNA的底物（前体物，原料）。在PCR反应中，dNTP浓度应在20μmol/L～200μmol/L。 dNTP溶液具有较强的酸性，使用时应用NaOH将pH值调至7.0～7.5。另外，4种脱氧核糖核苷三磷酸的浓度要相等。 ⑹ Taq DNA聚合酶：催化底物合成DNA新链。该酶具有很强的耐热性（经95℃持续高温仍不变性、失活），因此，加一次酶可完成整个PCR反应。在100μl反应体系中，一般需要Taq DNA聚合酶的用量为0.5u～5u。 ⑺ 引物：与目的基因的特异序列结合，并引导新链DNA的合成。PCR之所以可对特异DNA序列进行扩增，关键在于引物，即引物决定要对哪一段基因进行扩增。在PCR反