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选修一 生物技术实践备考填空 PAGE PAGE 1 基础课时案39　微生物的培养和利用 2016备考·最新考纲 1．微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)eq \a\vs4\al(成分) eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物,质以及氧气的需求)) (2)分类eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(固体培养基：含凝固剂,液体培养基：不含凝固剂)) 2．无菌技术 (1)关键：防止外来杂菌的入侵。 (2)不同对象的无菌操作方法[连一连] 3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 eq \x(计算)→eq \x(称量)→eq \x(溶化)→eq \x(灭菌)→eq \x(倒平板) (2)纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。 ③常用的微生物接种方法有两种 a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 深度思考 如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考 (1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？ (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 提示　(1)获得效果A的接种方法为稀释涂布平板法，获得效果B的接种方法为平板划线法。 (2)最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灭菌。 二、微生物的筛选和计数 1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。 (2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。 (3)实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 2．分解纤维素的微生物的分离 (1)纤维素酶 ①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。 ②作用 纤维素eq \o(――→,\s\up11(C1酶),\s\do4(Cx酶))纤维二糖eq \o(――→,\s\up7(葡萄糖苷酶))葡萄糖 (2)纤维素分解菌的筛选 ①原理 　　　　　　 　纤维素分解菌 　　　　　　 　　　↓ eq \b\lc\ \rc\}(\a\vs4\al\co1(刚果红,纤维素))→红色复合物eq \o(――→,\s\up7(纤维素酶))红色消失，出现透明圈 ②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 ④实验流程 土壤取样：富含纤维素的环境 ↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度 ↓ 梯度稀释：制备系列稀释液 ↓ 涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 ↓ 挑选产生透明圈的菌落 考点一　微生物的实验室培养　 1．消毒和灭菌的区别 项目 概念 常用方法 应用的范围 消毒 使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法：在100 ℃下煮沸5～6 min 一般物品 巴氏消毒法：70～75 ℃下煮30 min或在80 ℃下煮15 min 一些不耐高温的液体，如牛奶 化学药剂消毒法 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等 紫外线消毒法：30 W紫外灯照射30 min 接种室 灭菌 使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 灼烧灭菌：酒精灯火焰 接种工具的灭菌 干热杀菌：160～170 ℃下灭菌1～2 h 玻璃器皿、金属工具的灭菌 高压蒸汽灭菌：121 ℃下灭菌15～30 min 培养基及容器的灭菌 2．选择培养基与鉴别培养基的比较 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培养基 培养基中加入某些化学物质 依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 培养基中加入某种指示剂或化学药品　 依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设