细胞培养传代标准操作规程.docVIP

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文件名称 Vero 细胞培养传代标准操作程序( SOP) 文件编号 YY-33001-2016(01) 页 码 第 页 共 页 起 草 人 关威 起草日期 2016 年 4 月 19 日 审 核 人 审核日期 年 月 日 批准日期 年 月 日 批 准 人 执行日期 年 月 日 版 本 号 01 分发号 1、目的 :建立 Vero 细胞培养传代标准操作规程,确保检验操作标准化、规 范化。为了保证培养细胞的正常生长,实验技术人员必须明确并正确执行细胞培 养传代的基本操作步骤,特制订实验室细胞培养传代操作流程。 2、范围 :适用于 Vero 细胞培养传代实验人员。 3、编制依据 《企业注册标准 WS4-(S-009-2)-2003Z》。 4、Vero 细胞培养传代操作规程 4.1 试药与试液 1、细胞:Vero 细胞。 2、液体:0.25%胰蛋白酶溶液; 7.5%碳酸氢钠溶液;小牛血清; PBS 缓冲 液;10×199培养液、灭菌注射用水、 EDTA 溶液。 4.2 仪器与用具 1、恒温培养箱; 2、倒置生物显微镜。 4.3 操作方法 4.3.1 细胞培养、传代 1、准备好细胞培养传代所需物品,紫外线照台 30min。 2、挑选细胞形态佳、无污染的 Vero细胞,弃旧生长液。 3、细胞面经少量 EDTA 溶液洗涤后,加入胰蛋白酶等消化液适量(胰酶铺 平培养瓶底为佳),倒置显微镜下观察培养瓶内细胞,一旦发现大量细胞胞质回 缩,细胞间隙增大,但未脱离培养瓶底,立刻用吸细胞液的滴管吸出胰酶弃去, 4、把细胞培养瓶置 37.0℃± 0.5℃孵育让残存的胰酶继续消化, (在 37℃胰 酶消化效果最佳),每 1min 把培养瓶拿到倒置显微镜下观察, 当观察到细胞变圆, 透亮,细胞间隙明显增大时 ,加入先配好的完全培养基适量终止消化,用吸管轻 柔吹打分散细胞,制备成均一的细胞悬液。 5、取一滴细胞悬液进行计数(此步骤是为了积累培养细胞的经验,观察多 少密度的细胞具体几天可以长满 ,待有经验后此步骤可以省略。 ) 6、传代:不同细胞根据细胞数量、生长快慢、难易等,一般按照 1:3-1:5 比例进行传代。先用滴管吹打混匀细胞悬液, 平均分配细胞悬液到各个培养瓶中, 补足完全培养基使液体总体积达到 40ml 左右,平放到培养箱中继续培养。 7、收拾所用物品、用 75%酒精喷洒操作台,擦台,保持台面整洁。 4.3.2 填写记录: 1、随试验进程做好试验记录 ( 按实验记录规范要求 ) ,包括试剂的厂家、批 号、效期, 试验时间, 试验结果。签字 2、填写仪器使用登记。 4.4 复核人复核 复核人复核、签字。 4.5 结果与判定 每天用显微镜观察细胞形态。

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