病原生物学综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测.docxVIP

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测 从临床标本中分离细菌的冃的是为了查找与疾病冇关的病原菌，这对于临床治疗及预后调 查是很有价值的。所以，在分离时应掌握以下原则，以便指导检出病原菌，避免漏诊误诊。 了解微生物在人体的分布。人体的很多部位与外界相通，存在正常菌群，分离时应注意 标本中的菌群是正常菌群的污染，还是致病菌。另外，机体的某些部位（如血液、骨髓）是 无菌的，如检出细菌，应视为致病菌。 了解标木来源及临床情况，以便有日的地检出病原菌。 根据标本来源和可能存在的病原菌确定选用各种分离培养基，以提高检出率。如血平板 可用于化脓性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌等的分离。 常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、 假单胞菌、流感杆菌等。脓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有 典型形态的菌体，芽胞有无，为临床提供最初的诊治依据。 粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板, 碱性蛋白豚水），尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。粪便标本中常见的病原菌有 志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标 木中因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌，因此，粪便标木 一般不作直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌、结核杆菌、疑似葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪 膜性肠炎，以及菌群失调时，才作直接涂片检查。 细菌鉴定工作的原则及基本方法是： 1、 必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是 以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。 2、 鉴定方法的选择。测定细菌特征的实验方法很多，应根据鉴定冃的选择有价值的、快速 简便的试齡项目，既能完成鉴定，试验项目又尽可能少。 一、 培养基的制备 Prcparation of Culture Media 【实验冃的】 1了解细菌生长的基木营养条件。 2熟悉培养基的种类。 3掌握培养基制备的原则和一般方法。 【实验原理】 培养基是用人工方法将微牛物牛长繁殖所需要的多种营养物质，按比例混合配制而成的营养 制品，其主耍用途是分离培养纯种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的种属，研究微 生物的生理及生化特性，制造疫苗、微生态制剂或其他微生物制剂。 培养基基本成分包括：（1）营养物质，如碳源、氮源、无机盐和生长因子等；（2）水份；（3） 凝固物质，最常用的凝固剂为琼脂；（4）抑制剂，如胆盐、抗生索等，其日的是抑制非检出 菌的生长或使其少牛长，有利于检出菌的牛长。 培养基的种类很多，根据物理性状，培养基可分为固体、半固体和液体培养基三种，固体培 养基又有平板和斜面之分。根据用途，培养基可分为： （1） 基础培养棊含有一般细菌生长繁殖需耍的最基本的营养物质 ,可作为一些特殊培养基的棊础成分。 （2） 营养培养基在基础培养基中加入某些特殊营养物质如血液、 血清或生长因子等，用以培养营养要求较高的微生物。 （3） 选择性培养基利用微生物对某些化学物质的敏感 性不同，在培养基中加入这类物质， 抑制不需要的微生物生长，有利于所需分离的微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物 的冃的。 （4） 鉴别培养基是一类含有某种特定化合物或试剂的培养基。某 种微生物在这种培养基上 培养后，产生某种特定代谢产物，与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征性反应 0 培养基的制备原则：（1）适当的营养成分；（2）合适的酸碱度；（3）配制后经灭菌手续使之无 菌，方可使用。将灭菌后的培养基在37°C培养24小时，必须无细菌生长。 培养基制备程序可分为调配、溶化、矫正pH、分装、灭菌、检定及保存等步骤。制备好的培 养基，应注明名称、制作日期，存放在4°C冰箱屮。 【实验内容和方法】 —肉汤培养基（meat infusion broth）的制备 供作一般细菌培养的基础培养基，其成分为： 牛肉浸膏3g 蛋白腺10g NaC15g 蒸憾水1000ml pH7. 4?7. 6 【材料】 天平称量纸药勺pH试纸（pH5. 4?9）三角烧瓶量筒试管试管架5ml吸管吸 头棉塞标签纸牛皮纸线绳 【方法】 1称取一定量的肉汤培养基，置于三角烧瓶中，加入适量的蒸镭水。 2溶解后校正pH至7. 4?7. 6,分装到三角烧瓶或试管中（装量以试管高度的1/4左右为宜）。 多数生化试齡用的鉴别培养基，可分装于毛细玻璃管内，加热熔封，灭菌后备用。 3三角烧瓶和试管口塞上用普通棉花制作的棉塞（棉塞的形状、大小和松紧要合适，才能起 到防止杂菌侵入培养基内而造成污染和有利通气的作用），在棉塞外包一层牛皮纸，以防火 菌时冷凝水沾湿棉塞。 4贴上标签，灭菌后使用。 二普通营养琼脂培养基