第四讲杀菌剂生物测定1.pptVIP

20世纪60年代后，有机磷杀菌剂、内吸杀菌剂和抗菌素类杀菌剂大量出现，杀菌剂提高到了一个新的阶段。 不能否定新的杀菌剂毒力，药效测定方法对此发挥了重要的作用。 杀菌剂毒力、药效测定方法尽管多种多样，但它的基本原理离不开杀菌剂的毒力作用方式和使用方式。 有的杀菌剂在田间的防治效果比室内离体条件下测定的毒力高，主要原因之一就是杀菌剂诱发植物体内产生植物杀菌素，提高了植物的抗病力，代森锰锌、苯莱特，可诱发菜豆生成菜豆朊。　 杀菌剂的毒作用方式尽管有很多，但大多数还是以杀死和抑制为主，而在实际生产中，这两种作用是很难以区别的，因为它们最终的结果都是阻止了病害的发生和发展。　　 因此，在实验室的一般毒力测定也常常只是观察病菌是否生长或发展,从而确定药剂毒力的大小,一般不再区分是杀菌作用还是抑菌作用。 同一种药剂，由于使用浓度、处理时间的不同可能表现出不同的毒杀作用方式。 生产上，为了保证对植物的安全和节约用药，一般多利用杀菌剂的抑菌作用，因为这样（抑制病菌孢子萌发或病菌生长）就能达到防病的目的。 但为了研究杀菌剂的作用机制，就必须区分清楚毒杀作用方式。 杀菌剂的毒力、药效测定，虽然可依据药剂的作用方式、使用方式和不同的研究目的而有各种各样的方法。 按基本原理可以归纳有两大类型。 杀菌剂毒力测定步骤 1.在室内进行杀菌剂生物测定。 2.在控制条件下，进行杀菌剂温室盆栽生物测定。 3.在自然条件下，进行杀菌剂的大田药效试验。 因为初步测定工作，往往药剂种类多，数量大，需要在短期内进行得出结果，以便进一步试验药效。 杀菌剂对病菌的毒杀作用方式 杀菌剂生物测定技术的基本类型 第一节 体壁的构造与功能 （一）孢子萌发法 基本原理：将供试药剂附着在载玻片上或其它适当的平面上，然后将供试病菌孢子悬浮液滴在上面（或将孢子悬浮液与药液混合后滴在载玻片上），在保温、保湿条件下培养一定时间后镜检，以孢子萌发率来判断杀菌剂的毒力。 突出优点：快速，试验当天即可获得结果。 不足之处：会导致某些不影响孢子萌发、但能通过诱导植物产生抗性而起防治作用的化合物漏筛。 第一节 体壁的构造与功能 1．孢子萌发表面的处理 萌发表面是孢子萌发的场所，必须符合两个条件 对孢子的萌发既无抑制作用又无促进作用 能使承受的液滴展布面积一致 常用的萌发表面 普通的载玻片 火棉胶薄膜法 凹玻片 缺点： 供试菌的孢子悬浮液（或与药剂混合液）滴在载玻片上形成的液滴展布面积很小，呈球状，作“悬滴”时容易失落； 不同液滴的展布面积相差较大，试验结果误差也较大。 第一节 体壁的构造与功能 普通的载玻片 普通的载玻片 洗液10min 自来水冲洗干净 蒸馏水冲洗 防尘条件下干燥 孢子萌发表面 火棉胶薄膜法 第一节 体壁的构造与功能 孢子萌发表面 5%火棉胶 0.25%火棉胶 将清洁干燥的玻片浸入后立即取出 无尘干燥10 h以上 无水乙醚 方法：用镊子夹取清洁干燥的玻片浸入火棉胶乙醚溶液后立即取出，待多余的流去，无尘条件下室温干燥10h以上。 特点：处理过的玻片上覆盖一层透明均匀膜，滴上的孢子悬浮液滴在玻板上展布较大的面积，而且面积大小比较均匀。 第一节 体壁的构造与功能 使用凹玻片、双凹载玻片 适于：滴加孢子悬浮液和杀菌剂的混合液。 不适于：喷粉或喷雾，造成药剂在凹处较多的沉积。 孢子萌发表面 适用范围：水溶性药剂（或已成水剂）、乳油稀释液或稳定的悬浮液（如胶悬剂的稀释液）可用此法，而WP由于是悬浮性差，不宜采用。 优点：操作简单、迅速，不需特殊设备。 缺点：因药剂和孢子始终处于充分接触状态，与田间自然情况下病害防治的实际相差很大，测得的毒力往往偏高。 第一节 体壁的构造与功能 2．药剂在玻片上的附着——液剂 药液与孢子悬浮液混合后定量滴于玻片上 药膜须在完全防尘、室温或特殊要求温度下进行干燥； 必须保持药膜上药量均匀一致，干燥过程中应始终保持玻片呈水平状态。 非水溶性化合物可用适当的有机溶剂溶解并稀释，但必须事先试验确认该有机溶剂无残留或仅有少量残留而对孢子萌发无影响； 用有机溶剂配制的药液不能滴加在火棉胶处理的载玻片上； 对表面张力小的有机溶剂配成的药剂应采用凹玻片法：将溶有药剂的有机溶剂滴在凹槽内，防尘条件下干燥后再滴加孢子悬浮液。 2．药剂在玻片上的附着——液剂 用吸液管定量滴加药液于载玻片上，在防尘条件下形成定量、定面积的药膜 注意事项 第一节 体壁的构造与功能 2．药剂在玻片上的附着——液剂 利用精密喷雾装置（Potter喷雾器）将药量直接喷于载玻片上，防尘干燥后即在玻片上形成均匀的薄膜，然后