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情境十一：抗生素类药物的分析 任务四：抗生素类药物含量测定 知识点：抗生素类药物的分析 课程：药品检验技术 β–内酰胺类抗生素含量测定 原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其碱性降解产物可消耗碘 青霉素族 头孢菌素族 NaOH 水解 4I2H + 8I- I2+2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 定量过量 剩 余 含量测定-----------碘量法 β–内酰胺类抗生素含量测定 -----------碘量法（ChP2000） 中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室 反应分两步进行： 水解反应 (按化学计算量进行) 氧化-还原反应 (无定量关系，受温度、pH值和时间等因素影响， 应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定) β–内酰胺类抗生素含量测定 因样品中杂质会消耗碘，故应作空白试验。 加入样品，不加碱； 其余试剂（醋酸盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都要加碱。 空白试验: 空白试验与经典空白试验不同： β–内酰胺类抗生素含量测定 中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室 试验条件:（I2氧化） 弱酸性（pH4.5） 20分钟后，耗碘量随时间的变化较小 碱↑ I2 → IO3- + I- 酸↑ 某些药物与碘生成复盐沉淀 温度（24～26℃） 温度＞38 ℃时未水解的供试品亦消耗碘 反应时间：（ 20分钟） β–内酰胺类抗生素含量测定 含量％＝ × × 对照品％ V样空 - V样 W对 V对空 - V对 W样 灵敏度高：样品 : 碘 = 1 : 8 反应条件、实验操作要求高 1份含量 V对、V对空 V样、V样空 加试剂次序、反应时间、滴定速度相同 特 点： β–内酰胺类抗生素含量测定 ----------- 原理：青霉素不与汞盐反应，其碱性降解产物可与Hg2+络和。 Hg+ + 2R-SH (RS)2Hg + 2H+ 方法说明： a、空白试验与碘量法类似，加样品，不加NaOH b、与碘量法相比，汞量法不需对照试验 电位配位滴定法（汞量法） β–内酰胺类抗生素含量测定 酸碱滴定法：应用广泛 硫醇汞盐法 羟肟酸比色法 HPLC法：应用广泛 咪唑 HgCl2 （λmax 324～345nm） 青霉素 青霉烯酸硫醇汞盐 NH2OH H+ Fe3+ β–内酰胺类 红色 其他方法 β–内酰胺类抗生素含量测定 中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室 填充剂 流动相 检测波长 峰形 阿莫西林峰与克拉维酸峰的分离度应大于3.5 色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶 磷酸盐缓冲液-甲醇(95:5) 流速为0.7ml/min； 检测波长为220nm 阿莫西林克拉维酸钾片 β–内酰胺类抗生素含量测定 取本品10片，置1000ml量瓶中，加水适量，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10?l注入液相色谱仪，记录色谱图； 另取阿莫西林对照品与克拉维酸对照品各适量，加水溶解，制成每1ml中含阿莫西林0.5mg和克拉维酸0.25mg的混合溶液，同法测定。 按外标法以峰面积分别计算供试品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。 测 定 法 ： 庆大霉素含量测定及方法 对微生物的活性无明显差异 毒副作用和耐药性不同 发酵菌种不同 工艺差别 C组分比例 不一致 规定控制各组分的相对百分含量 庆大霉素含量测定及方法 + + 4 10 . pH 吲哚衍生物 巯基醋酸 邻苯二醛 氨基 λmax = 330nm 衍生化原理 庆大霉素含量测定及方法 四环素类药物含量测定及方法 HPLC法 盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关物质及ATC峰间的分离度均应符合要求。 定量方法：外标法以峰面积计。 返 回 氨基糖苷类药物含量测定及方法 药典仍采用抗生素微生物检定法和HPLC方法测定氨基糖苷类抗生素及各种制剂的含量。 抗生素类药物含量测定及方法 含量测定 ChP、USP HPLC法（外标法） 系统适用性试验 ①防护柱 ②有关物质的混合溶液（ETC 、 EATC