第九章亲和纯化技术课件.pptVIP

四、 载体的活化与偶联 * Q:载体在于配基偶联前为什么要“活化”？ A：载体相对“惰性”，不能直接与配基连接（不容易发生化学反应），因此在偶联前（载体与配基对接），需要对载体进行“活化” 活化的方式有很多种…… 载体的活化的方式 * 多糖类载体 聚丙烯酰胺凝胶载体的活化法 * 酰胺基 + 含氮化合物 → 胺衍生物 五、 影响吸附亲和力的几个因素 * * ※六、 配基与间隔臂的连接 （一）、含氮配基的连接 （二）、含羧基配基的连接 （三）、含巯基配基的连接 （四）、含醛基、酮基、羟基配基的连接 七、 亲和层析的吸附和洗脱 * * （一）、影响吸附的条件 * 1、亲和吸附剂及配体的性质 缓冲液的种类、离子强度、pH、温度和层析流速有关。 2、温度 升高会使吸附作用减弱。 3、流速 每小时低于10 ml/cm2。 4、上样体积 为柱床体积的5%。 * 离子效应 * 配基与载体-间隔臂的不完全结合，将无关离子基团引入吸附剂。 具有离子基团的亲和吸附剂会影响蛋白质的洗脱行为。 疏水基团 * 吸附剂疏水性基团与蛋白质结构中的疏水区相互吸引，形成非专一性吸附。 疏水基团： （1）长的烃链结构的“手臂”：烃链 （2）疏水性配基 复合亲和力 * 离子效应作用，又有疏水作用。 提高选择性 对每一具体系统找出最佳的配给