QIAamp DNA mini Kit（从组织中提取gDNA）.pdf

Sample Assay Technologies QIAamp® DNA Mini-从组织中纯化从组织中纯化DNA 从组织中纯化从组织中纯化 2012年04月 胡川 Protocol: DNA Purification from Tissues Sample Assay Technologies (QIAamp DNA Mini Kit) 注意事项：注意事项： 注意事项注意事项：： 所有离心步骤在室温（15–25°C ）下完成 若样本中DNA的拷贝数小于10,000，请参考第18页使用Carrier DNA 避免反复冻融样本，以免DNA降解 转录活跃的组织，例如肝脏和肾脏，其RNA含量高，这些RNA将会和基因组DNA一起被 纯化出来。RNA的存在会抑制一些下游酶反应，但不会影响PCR。如果需要获得无RNA 的DNA样本，请参照Protocol中的5a，增加RNase A消化的步骤 准备事项：准备事项： 准备事项准备事项：： 将样品置于室温(15–25°C) 预热两个水浴装置或其他加热设备：1个设置56°C 以备第3步使用； 1个设置70°C 以备第 5步使用 将Buffer AE或无菌水平衡至室温，为11步洗脱之用 按第17页的说明准备Buffer AW1，AW2 若Buffer ATL或Buffer AL发生沉淀，可在56°C 水浴锅中水浴将其融解 QIAamp® DNA Mini-从组织从组织中中纯化纯化DNA 2 从从组织组织中中纯化纯化 Sample Assay Technologies 溶液配制溶液配制 溶液配制溶液配制 Buffer AW1(室温下储存, 15–25°C) Buffer AW1 以浓缩液的形式提供。在使用前，加入适量体积的乙醇(96–100%)至瓶身标注的位 置。Buffer AW1 在盖紧盖子的情况下，可以在室温下储存1年。 Buffer AW2* (室温下储存, 15–25°C) Buffer AW2以浓缩液的形式提供。在使用前，加入适量体积的乙醇(96–100%)至瓶身标注的位 置。Buffer AW2在盖紧盖子的情况下，可以在室温下储存1年。 QIAamp® DNA Mini-从组织从组织中中纯化纯化DNA 3 从从组织组织中中纯化纯化 Sample Assay Technologies 操作流程：操作流程： 操作流程操作流程：： 1、切取或从储存容器、切取或从储存容器中取出组织中取出组织样本样本。。确保组织样本不要超过确保组织样本不要超过25mg （如果是脾脏样本（如果是脾脏样本，， 、、切取或从储存容器切取或从储存容器中取出组织中取出组织样本样本。。确保组织样本不要超过确保组织样本不要超过 （（如果是脾脏样本如果是脾脏样本，， 不要超过不要超过10mg）） 不要超过不要超过 ）） 称重是估测量的最精确的方法。 如果是从脾脏组织中提取DNA，不要超过起始样本不要超过10mg。 DNA产量取决于样本量和样本类型。 1mg组织的DNA产量大约为0.2–1.2 µg 。 2、切割、切割(step 2a), 研磨研磨(step 2b), 或者机械破碎或者机械破碎(step 2c) 组织组织 、、切割切割 研磨研磨 或者机械破碎或者机械破碎 组织组织 QIAamp操作流程可以不做样本机械破碎，但是如果在裂解前在液氮中研磨样本(step 2b)， 或者用机械匀浆(step 2c) ，将有助于减少裂解时间。