水中细菌总数的测定-分析大课堂.pptVIP

水中菌落总数的测定 课程：分析大课堂技能培训 （水环境监测工） 实验目的 1 学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法 2 了解水源水的平板菌落计数的原则 实验目的 实验原理 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出水中细菌总数仅是一种近似值。 目前一般是采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细菌总数。 实验原理 实验操作 1 水体取样 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶的瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 2 自来水取样 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。 3 河水取样 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）。 注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。 实验操作 4 涂布平板法 （1）加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。 （2）倒制平板，每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。 （3）用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的 外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5 倒置于37℃培养箱中培养24h 实验操作 6 菌落计数 （1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数。 （3）如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30—300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。 实验操作 平皿分4部分点数（见图） 求同一稀释度的平均菌落数 如： （A1数 + A2数 + A3数） /3 实验操作 实验操作 7 菌落计数的报告 （1）平板菌落数的选择 （2）稀释度的选择 （3）菌落数的报告 菌落数＜100 按实有数报告 菌落数＞100 采用两位有效数，后面数值 四舍五（也可用10的指数表示） 无 法 计 数 无法计数报告 （注明水样的稀释倍数） 实验操作 稀释度的选择 1 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之 2 若有两个稀释度其生长之菌落数均在30-300，则应视二者之比如何来决定；若其比值小于2，应报告平均数；若其比值大于2则报告其中较小的数字。 3 若所有平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 实验操作 稀释度的选择 4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 6 若所有稀释度的菌落数均不可计数，则以最高稀释倍数无法计数报告之。 实验操作 稀释度选择及细菌总数报告方法 稀释液及菌落数 两稀释度 菌落数之比 细菌总数 (个/g或个/ml) 报告方式 (个/g或个/ml) 10-1 10-2 10-3 1 1,365 164 20 — 16,400 16，000或1.6×104 2 2,760 295 46 1.6 37,50 38，000或 3.8 ×104 3 2,890 271 60 2.2 27,100 27，000或2.7×104 4 不可计 4,650 513 — 513,000 510，000或 5.1 ×105 5 27 11 5 — 270 270或2.7 ×102 6 不可计 305 12 — 30,500 31，000或3.1 ×104 7 不可计 不可计 不可计 — 10-3无法计数 平均菌落数 稀释倍数 次 谢 谢 水中菌落总数的测定