酶固定化课堂作业.pptVIP

第二节 酶的固定化方法 第二节 酶的固定化方法 一、吸附法 定义：利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上，而使酶固定化的方法。（通过各种次级键吸附） 常用载体： 活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷等。 制备方法： 将酶液与吸附剂直接接触，再经洗涤除去不吸附的酶，得到固定化酶。 第二节 酶的固定化方法 一、吸附法 特点： 优点：操作简便，条件温和，不会引起酶或细胞变性失活；载体可反复使用。 缺点：酶和载体吸附力较弱，易解吸脱落。 应用范围： 一般用于酶成本较低的催化过程，尤其适用于细胞的固定化。 一、酶的固定化方法 例：以尼龙膜包埋酶时，将酶液及亲水性单体（如己二胺）溶于水制成水溶液。另外，将疏水性单体（癸二酰氯等）溶于氯仿或甲苯等与水混溶的有机溶剂。然后，将这两种互不相溶的液体混和在一起。加入乳化剂乳化，使酶液分散成小液滴。此时，亲水性的已二胺与疏水性的癸二酰氯就在二相界面聚合成半透膜，将酶包埋在小球内。再加Tween—20，使乳化破坏，用离心分离即可得用半透膜包埋的微囊型固定化酶。 一、酶的固定化方法 三、结合法 一、酶的固定化方法 四、交联法 1、定义：借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。 3、特点 优点：固定化酶或固定化菌体结合牢固，可以长时间使用。 缺点：交联反应条件较激烈，酶分子的多个基团被交联，致使酶活力损失较大；通过酶分子间交联形成的固定化酶，颗粒很小，使用不便。 一、酶的固定化方法 五、热处理法 定义：将含酶细胞在一定温度下加热处理一段时间，使酶固定在菌体内而制得。 特点： 只适用于热稳定性较好的酶的固定化。 热处理时，要严格控制好加热温度和时间，以免引起酶的变性失活。 例如：链霉菌细胞中葡萄糖异构酶的固定化，可采用60~65℃下处理15min，葡萄糖异构酶将全部固定在菌体内。 一、酶的固定化方法 列表比较各种固定化方法的载体和特点 一、固定化酶的应用 固定化酶的优点（相对于游离酶）： 酶的稳定性增加； 固定化酶可反复或连续使用较长时间； 固定化酶不溶于反应溶液，易于和反应产物分离。 一、固定化酶的应用 1、固定化酶在工业生产中的应用 氨基酰化酶：世界上第一种工业化生产的固定化酶 一、固定化酶的应用 1、固定化酶在工业生产中的应用 葡萄糖异构酶：世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。 一、固定化酶的应用 2、固定化酶在酶传感器中的应用 酶传感器：由固定化酶与能量转换器（电极、场效应管等）密切结合而成的传感装置，是生物传感器的一种。 酶电极：由固定化酶与各种电极密切结合的一种酶传感器。 酶传感器优点： 既有固定化酶的优点，又具有电化学电极的高灵敏度； 酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。 一、固定化酶的应用 2、固定化酶在酶传感器中的应用 应用实例： 葡萄糖氧化酶电极（氧电极） 青霉素酶电极（pH电极） ··· 二、固定化细胞及应用 细胞固定化：通过各种方法将细胞与水不溶性的载体结合，制备固定化细胞的过程。 固定化细胞:固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞 固定化活细胞或固定化增殖细胞——固定化细胞能够进行正常的生长、繁殖和新陈代谢 分类：固定化微生物细胞、固定化植物细胞、固定化动物细胞 固定化方法：吸附法、包埋法 （一）固定化微生物细胞及应用 1、固定化微生物细胞的特点： ① 细胞密度提高，可提高产率 ②保持了细胞的完整结构和天然状态，稳定性好 ③发酵稳定性好，可反复使用或连续使用较长时间 ④提高工程菌的质粒稳定性 ⑤ 保持了细胞内原有的酶系、辅酶体系和代谢调控体系，可按原来的代谢途径进行新陈代谢，并进行有效的代谢调控 （一）固定化微生物细胞及应用 3、固定化细胞发酵产酶的工艺条件控制（P60） （1）固定化细胞的预培养 固定化细胞在载体上生长好以后用于发酵产酶 （2）溶解氧的供给 增加溶解氧的供给——加大通气量 （3）温度控制 预先调节好反应器温度 （4）培养基组分的控制 控制培养基中可能影响某些固定化载体结构的组分； 降低培养基粘度 （一）固定化微生物细胞及应用 4、固定化微生物细胞的应用 （1）利用固定化微生物细胞生产各种产物： 酒精酒类、氨基酸、有机酸、酶和辅酶、抗生素 （一）固定化微生物细胞的应用 （2）固定化微生物细胞制作微生物传感器： 微生物传感器：由固定化微生物细胞与各种能量转换器密切结合而成的传感装置。 微生物传感器的分类： 呼吸活性测定型：测定微生物细胞呼吸作用消耗的O2或产生的CO2 电极活性测定型：测定与微生物细胞新陈代谢有关的其他电极活性物质的量的变化 其它应用：如