02_氨基酸.pptVIP

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)：抑制性神经递质 牛磺酸(taurine)：胆汁酸的组成成分 组胺(histamine)：血管舒张剂 氨基酸的两性解离和酸碱滴定曲线 HA ←→ A- + H+ 酸 碱 质子 pH=pKa/ +Log[A-]／[HA] （1）pKa/ 就是HA50%解离（[碱] = [酸]）时溶液的pH值， Ka/就是此时溶液的[H+] （2）当HA50%解离时，溶液的pH值等于pKa/ （3）pH = pKa/ 时，[碱] = [酸]（50%解离） pH pKa/ 时，[碱] [酸]（＞50%解离） pH pKa/ 时， [酸] [碱]（＜50%解离） ★pH pI时，氨基酸带负电荷， COOH 解离成-COO-，向正极移动。 　 ★ pH = pI时，氨基酸净电荷为零 ★ pH pI时，氨基酸带正电荷，-NH2解离成-NH3+，向负极移动。 ? 肽键 氨基酸间脱水后形成的共价键称肽键（酰氨键）， 蛋白质分子中AA残基连接的基本方式。 短杆菌肽S（抗生素） L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val ? ? L-Orn L-Orn ? ? L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu 蛋白质表面有许多极性基团，同时也存在少量疏水基团。根据蛋白质表面疏水侧链的多少和疏水性的差异，可以分离纯化蛋白质。 在柱层析的填料基质上连接一些疏水基团，可以利用蛋白质疏水侧链与层析基质上的疏水基团的相互作用，进行蛋白质的分离纯化。 根据蛋白质分子的大小和形状差异 混合的蛋白质样品按其分子大小依次洗脱、彼此分离 大的先洗脱、小的后洗脱 配体：能与某种蛋白质专一结合的分子 亲和层析：根据蛋白质的配体专一性分离目标蛋白 激素与受体蛋白，抗原与抗体，生物素与亲和素，酶与酶的底物、辅酶、抑制剂、效应物及其结构类似物。 免疫亲和层析 亲和层析柱－抗体 ： 分离蛋白质混合液中的抗原 电泳：带电质点在电场中的移动速度和方向主要取决于它们的电荷性质、电荷数目、颗粒大小及形状。 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) ●非变性….(Native) ●SDS-…… .(SDS) ●双向电泳 ●毛细管电泳 SDS：十二烷基硫酸钠，带负电荷的阴离子去垢剂。 蛋白质用SDS处理后，高级结构解体，带净负电荷，凝胶电泳时的迁移率和它们的相对分子量成正比。 可用于测目标蛋白的相对分子量。 还原法：先用2－巯基乙醇处理使二硫键还原成巯基，再用烷化剂修饰巯基，阻止二硫键再度形成。 氧化法：先用过甲酸使二硫键断裂，生成半胱氨磺酸。再用烷化剂修饰巯基 酸水解： HCl（6mol/L） ，回流煮沸20h，完全水解。 不引起消旋作用，得到L-AA，但是，色AA完全被沸酸所破坏，羟基AA（丝氨酸及苏氨酸）有一小部分被分解，天冬酰胺和谷胺酰胺的酰胺基被水解下来 碱水解：与NaOH (5mol/L)共煮10-20h,完全水解。色氨酸是稳定的，但是，产生消旋现象，所得产物是D型和L型氨基酸的混合物（称消旋物），丝氨酸及苏氨酸Arg，Cys会受到破坏。 ①胰蛋白酶 ：- Lys — X- 、 -Arg— X-? (X ≠ Pro) ②胰凝乳蛋白酶： - Tyr—X- 、-Trp—X-、-Phe—X- (X ≠ Pro) ③溴化氰： - Met—X - 产率85% 每一种方法产生的碎片都是不同的，但是一定有部分的重叠序列。每个碎片分别测序，然后利用重叠重构完整的肽链氨基酸顺序。 ④ 其它的酶也可以部分水解蛋白质多肽链 1． Edman法 （1）耦联 PITC ＋ H２N—A-B-C-D pH8—9，40℃ PTC——A-B-C-