聚合酶链式反响技术应用.pptVIP

ABI 7500实时荧光定量PCR仪 普通梯度PCR仪 PCR用途 生命学科：基因克隆、基因检测 医学：分子诊断-遗传病的诊断、病原体检测，基因配型 法医学：个体识别、亲缘鉴定 考古学 THANK YOU FOR YOUR ATTENTION * （4）模板DNA 但不能有蛋白质变性剂、DNA酶、Mg2+的螯合剂等影响DNA聚合酶的活性。 ② 模板的量： 不能太多，100?l反应体系中100ng足够。 ① 纯度： PCR对模板DNA的纯度要求不高。 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响 在一般的 PCR反应中，dNTP浓度200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0 mmol/L为宜 Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增， 浓度过低会降低 Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少 （5） Mg2+ PCR反应条件优化 反应温度（变性、退火、延伸） 反应时间（变性、退火、延伸） 循环次数（PCR效率及产物量） 1、温度 变性温度：94-97 ℃ 退火温度：低于引物Tm 5 ℃左右，一般55-60℃ 温度过高：降低扩增效率； 温度过低：增加非特异性扩增 延伸温度：72 ℃，此时Taq酶具有较高的酶促活性 2、时间 第一次变性应给予足够时间（5-7分钟） 每一个步骤所需时间取决于扩增片段的长度，一般为